Estudante: Thayná Torres Gonzalez
Orientação: Tiago Gräf
Coorientação: Luciane Amorim Santos
Título da dissertação: “AVALIAÇÃO DA FREQUÊNCIA DE MUTAÇÕES DE RESISTÊNCIA EM PACIENTES VIVENDO COM HIV E EM TRATAMENTO ANTIRRETROVIRAL, AMOSTRADOS PELA REDE NACIONAL DE GENOTIPAGEM DO BRASIL (RENAGENO)”
Programa: Pós-Graduação em Biotecnologia em Saúde e Medicina Investigativa
Data de defesa: 24/02/2025
Horário: 14h00
Local: Sala Virtual do Zoom
ID da reunião: 889 2041 0636
Senha: thayna

Resumo

INTRODUÇÃO: Uma estratégia notável para o manejo da infecção pelo HIV é a terapia antirretroviral (TARV). No entanto, uma barreira significativa para o sucesso da TARV é o surgimento de mutações de resistência aos medicamentos (DRMs), que podem ser monitoradas por meio de testes de genotipagem que sequenciam o genoma do vírus em busca dessas mutações. O Brasil representa uma região epidêmica importante do HIV e possui um dos maiores programas públicos de TARV do mundo. OBJETIVO: Esse estudo tem como objetivo analisar a dinâmica da frequência das DRMs ao longo de 10 anos do serviço público de genotipagem no Brasil e entender fatores populacionais, virais e políticas públicas que possam impactar o surgimento dessas mutações. MATERIAL E MÉTODOS: Analisamos 43.480 sequências parciais do gene pol do HIV de indivíduos em tratamento, amostrados entre 2008 e 2017 em todas as regiões do país. As mutações foram identificadas utilizando a ferramenta Stanford HIVdb Program, e os dados resultantes foram analisados no software R. Uma análise de regressão logística foi realizada para estimar a razão de chances (OR, do inglês odds ratio) de ocorrência de DRMs considerando fatores sociodemográficos, subtipos virais e esquema terapêutico vigente no ano de coleta relacionados a cada sequência analisada. RESULTADOS: Do conjunto de dados avaliado, 82,9% das sequencias apresentaram pelo menos uma DRM e 65,5% apresentaram resistência a múltiplas classes de medicamentos. Nosso modelo de regressão logística revelou que mulheres, indivíduos mais jovens, de maior escolaridade e com subtipos não-B e não-F1 possuem menor OR de apresentar DRM. Além disso, moradores das regiões Norte e Nordeste e que usavam o esquema de TARV vigente antes de 2013, apresentaram OR maior de ocorrência de DRMs. Foi observada uma redução geral na frequência das DRMs ao longo dos anos para todas as classes de antirretrovirais, com algumas mutações apresentando quedas mais expressivas, como a M184V, relacionada a inibidores da transcriptase reversa nucleosídicos (NRTIs) e mutações relacionadas aos inibidores de protease (PIs). No sentido oposto, observamos o aumento das mutações K65R e S68G relacionadas aos NRTIs. De forma geral, as DRMs possuem uma dinâmica temporal similar nos subtipos B, C e F1, com exceção de algumas mutações de menor frequência. CONCLUSÕES: Os resultados observados aqui refletem as atualizações nas diretrizes TARV ao longo dos anos e destacam os benefícios dos novos protocolos de tratamento na redução da frequência geral das DRMs. Ao mesmo tempo, nosso trabalho ressalta a necessidade de monitoramento constante de mutações específicas que podem surgir a partir da introdução de novos fármacos e podem afetar a eficácia da TARV. Por fim, revelamos uma assimetria de ocorrência de DRMs em alguns grupos populacionais e regiões do Brasil, fornecendo informações para o aperfeiçoamento das políticas de TARV, visando uma melhor aderência e acompanhamento desses grupos.

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Estudante: Sérgio Ricardo Teixeira Daltro
Orientação: Milena Botelho Pereira Soares
Título da tese: Avaliação do potencial terapêutico de vesículas extracelulares derivadas de células-tronco mesenquimais de cordão umbilical humano em modelo experimental de dermatite atópica em camundongos
Programa: Pós-Graduação em Patologia Humana e Experimental
Data de defesa: 04/02/2025
Horário: 09h00
Local: Sala Virtual do Zoom
ID da reunião: 815 7196 6759
Senha: defesa

Resumo

A dermatite atópica (DA) é uma doença inflamatória crônica da pele, caracterizada por lesões eczematosas e prurido intenso, configurando um grande desafio de saúde pública. As terapias convencionais, baseadas principalmente em corticosteroides e imunossupressores, apresentam eficácia limitada e estão associadas a efeitos adversos significativos. O uso terapêutico de células-tronco mesenquimais (CTMs) ou seu secretoma, incluindo vesículas extracelulares (VEs), tem demonstrado efeitos imunomoduladores promissores no tratamento de doenças imunomediadas. Neste estudo, foi avaliado o potencial terapêutico de VEs derivadas de CTMs de cordão umbilical humano em camundongos BALB/c com dermatite atópica induzida por epicutânea aplicação de 2,4-dinitroclorobenzeno (DNCB). As CTMs foram isoladas, caracterizadas e utilizadas para obtenção das VEs por ultracentrifugação. As VEs foram caracterizadas quanto ao tamanho, índice de polidispersão, potencial zeta e morfologia por microscopia eletrônica de transmissão. Os resultados demonstraram que as VEs reduziram significativamente os marcadores inflamatórios, como o número de mastócitos, a espessura da epiderme e as citocinas pró-inflamatórias IL-4 e TSLP, além de promoverem a recuperação da integridade da barreira cutânea, evidenciada pelo aumento dos lipídios no estrato córneo. A análise histológica revelou uma organização epidérmica superior nos grupos tratados, enquanto a avaliação clínica indicou melhora significativa das lesões. Em modelo in vitro de ativação de queratinócitos, as VEs modularem a expressão gênica de diversos genes associados à DA. Os efeitos terapêuticos observados foram comparáveis aos da dexametasona, consolidando as VEs como agentes imunomoduladores eficazes. Os achados reforçam o potencial das VEs derivadas de CTMs no tratamento da dermatite atópica, oferecendo uma abordagem inovadora e promissora com menor risco de efeitos adversos. Palavras-chave: células-tronco mesenquimais, vesículas extracelulares, dermatite atópica, imunomodulação.

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Estudante: Girlaine Café Santos
Orientação: Milena Botelho Pereira Soares
Título da tese: Avaliação do potencial pró angiogênico/arteriogênico de células-tronco/estromais mesenquimais humanas geneticamente modificadas para superexpressar o fator inibidor da leucemia em modelo de isquemia crítica de membros
Programa: Pós-Graduação em Patologia Humana e Experimental
Data de defesa: 30/01/2025
Horário: 14h00
Local: Sala Virtual do Zoom
ID da reunião: 854 9013 8546
Senha: defesa

Resumo

INTRODUÇÃO: A doença arterial periférica (DAP) é uma afecção vascular crônica cujo desfecho mais extremo, a isquemia crítica de membros inferiores (ICM), é umas das principais causas de morbimortalidade mundial. Apesar da alta prevalência, a DAP segue sem tratamento eficaz para recuperação da vasculatura perdida. As células-tronco/estromais mesenquimais (MSC) são células com capacidade de secreção de moléculas mediadoras de efeitos biológicos como angiogênese e arteriogênese, representando uma opção terapêutica contra a ICM. O potencial terapêutico de MSC pode ser incrementado através da superexpressão de fatores de interesse, via modificação genética. O fator inibidor da leucemia (LIF) foi descrito como uma citocina capaz de aumentar o potencial pró-angiogênico quando superexpresso em MSC. OBJETIVOS: Gerar uma linhagem de MSC humanas superexpressando LIF (MSC_LIF) e avaliar o seu potencial pró-angiogênico/arteriogênico em modelos in vitro e in vivo. MÉTODOS: As MSC foram isoladas de cordão umbilical e transduzidas através de vetores lentivirais de segunda geração expressando o gene LIF. A eficiência da transdução e produção da proteína LIF foram confirmadas por RT-qPCR e ELISA, respectivamente. A caracterização das células geradas foi realizada por diferenciação nas três linhagens mesodérmicas e imunofenotipagem. A duplicação celular foi avaliada por Population Doubling e ensaio de UFC-F. A análise da expressão gênica dos principais marcadores de angiogênese, células perivasculares e arteriogênese foi realizada por RT-qPCR. O potencial de formação de microvasos in vitro foi investigado pelo ensaio de brotamento de anéis aórticos. O ensaio do plug de Matrigel® investigou o potencial de recrutamento e migração da vasculatura in vivo. O modelo de isquemia crítica de membros posteriores avaliou o potencial de MSC_LIF na formação de vasos arteriais colaterais e proteção tecidual contra isquemia in vivo. RESULTADOS: MSC_LIF apresentou um aumento de expressão e secreção de LIF em relação às células não transduzidas, indicando o sucesso da modificação genética. A imonofenotipagem e o ensaio de diferenciação mesodérmica mostraram que a MSC_LIF manteve o fenótipo e a multipotência característicos de MSC. Os ensaios de UFC-F e PD demonstraram aumento da duplicação celular em MSC_LIF. A análise de expressão gênica demonstrou regulação positiva de genes essenciais para a angiogênese, arteriogênese e para marcadores perivasculares. O ensaio de brotamento de anéis aórticos mostrou que MSC_LIF promoveu um maior surgimento de brotamentos de microvasos a partir do tecido arterial. O ensaio do plug de Matrigel® revelou que MSC_LIF foi mais eficaz em induzir migração de vasos sanguíneos CD31+ e arteríolas aSMA+ para o interior dos plugs. O tratamento com MSC_LIF restaurou o fluxo sanguíneo pela formação de arteríolas aSMA+, melhorou o escore isquêmico e o desempenho funcional, além de promover maior proteção tecidual contra isquemia no modelo de isquemia crítica de membros. CONCLUSÃO: A superexpressão de LIF é uma estratégia promissora para aumentar o potencial angiogênico/arteriogênico e de reparação tecidual de MSC para o tratamento da CLI. PALAVRAS-CHAVE: Doença arterial periférica, Células- tronco/estromais mesenquimais, LIF, Angiogênese, Arteriogênese, Isquemia crítica de membros inferiores.

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Estudante: Victoria Cruz Paraná
Orientação: Maria Fernanda Rios Grassi
Coorientação: Luana Leandro Gois
Título da dissertação: AVALIAÇÃO DA RESPOSTA IMUNE HUMORAL E CELULAR DE INDIVÍDUOS VACINADOS COM DOSES DE REFORÇO DA VACINA ANTISARS- COV-2
Programa: Pós-Graduação em Biotecnologia em Saúde e Medicina Investigativa
Data de defesa: 04/02/2025
Horário: 14h00
Local: Sala Virtual do Zoom
ID da reunião: 840 1173 1758
Senha: victoria

Resumo

Introdução: As vacinas contra o SARS-CoV-2 induzem respostas humoral e celular específicas, mas o surgimento de variantes tornou necessárias doses de reforço. Objetivos: Este trabalho caracteriza a resposta imune humoral e celular após doses de reforço das vacinas anti-Sars-CoV-2. Metodologia: A população do estudo foi composta por 25 profissionais de saúde que completaram o esquema vacinal primário (CoronaVac ou ChAdOx1) e duas doses de reforço (BNT162b2 ou Ad26.COV2.S). Os títulos de anticorpos neutralizantes (NAb) foram determinados com o kit SARS-CoV-2 nAb ELISA e o título de IgG com ELISA indireto. Células T produtoras de IFN-γ e subpopulações de células T de memória produtoras de IFN-γ e TNF em resposta a peptídeos da sequência original e variantes Delta, Gama, Ômicron, Ômicron BA.4-5 e Ômicron XBB.1 foram quantificadas por ELISPOT e por citometria de fluxo, respectivamente. Resultados: A idade média dos participantes foi de 63,0±4,4 anos, a maioria era do sexo feminino (68%) e sem infecção prévia por Sars-CoV-2 (53%). Após o 1º reforço (n=25), 100% apresentaram NAb detectáveis [título geométrico médio (GMT): 223,1±1,0] e títulos de IgG (média: 1785±2705). Após o 2º reforço (n=18), os níveis de IgG (média: 3301±3355) e nAb (GMT: 460,4±4,3) aumentaram (p<0,05). Em relação à resposta celular, a frequência de respondedores e o número de SFC/10⁶ PBMC em resposta aos peptídeos da variante Ômicron XBB.1 após o 1º reforço (n=14) (93%; Mediana: 438,7 SFC/10⁶ PBMC; IQR 336,2–470,0 SFC/10⁶ PBMC) foram maiores comparados ao 2º reforço (n=16) (25%; Mediana: 27,5 SFC/10⁶ PBMC; IQR 0,0–275,0 SFC/10⁶ PBMC) (p<0,05). Além disso, o 1º reforço (n=18) vacinal teve maior frequência de células T de memória efetora (TEM) e transicional (TTM) CD4+ em resposta à sequência original e variantes. Após o 2º reforço (n=18), houve redução das células TTM CD4+, exceto para a variante Delta, enquanto as TEM CD8+ aumentaram. Houve predomínio de predomínio de células monofuncionais (IFN-γ+ ou TNF-α+). O 1º reforço elevou células monofuncionais IFNγ+ na subpopulação T de memória central (TCM) em resposta à Ômicron (Mediana: 1,1%; IQR 0,04 – 3,2%), mas essa resposta (Mediana: 0,00%; IQR 0,00 – 0,42%) e a produção de IFN-γ por linfócitos T CD4+ TTM para Ômicron XBB.1 (Mediana: 0,56%; IQR 0,04 – 1,40% vs Mediana: 0,07%; IQR 0,00 – 0,24%) diminuíram após o 2º reforço (p<0,05). Respostas TNF-α+ em T CD8+ TTM a Ômicron BA.4-5 também reduziram após o 2º reforço (Mediana: 0,87%; IQR 0,03 – 2,22% vs Mediana: 0,17%; IQR 0,12 – 0,84%) (p=0,02). Conclusão: Houve persistência da resposta humoral e celular após o 1º reforço vacinal em resposta à sequência do SARS-CoV-2 original e variantes. Todavia, não foi observado incremento da resposta celular após o 2º reforço. São necessários mais estudos para compreender as respostas imunológicas com doses adicionais e avaliar a necessidade de novos reforços

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Estudante: Dahara Keyse Carvalho Silva
Orientação: Milena Botelho Pereira Soares
Título da tese: Avaliação da atividade imunomoduladora da fisalina F em células humanas e de camundongos
Programa: Pós-Graduação em Patologia Humana e Experimental
Data de defesa: 30/01/2025
Horário: 09h00
Local: Sala Virtual do Zoom
ID da reunião: 856 3388 8298
Senha: defesa

Resumo

Distúrbios no sistema imune são responsáveis pelo desenvolvimento de diversas doenças. Os medicamentos utilizados no tratamento dessas condições apresentam efeitos adversos graves, e por isso, há a necessidade de novos fármacos. Dentro desse contexto, as fisalinas possuem diversas atividades farmacológicas já descritas em literatura, sendo a fisalina F um importante composto com atividade imunomoduladora. Dessa forma, o presente estudo teve como objetivo investigar os efeitos imunomoduladores da fisalina F em esplenócitos de camundongo BALB/c e em células mononucleares do sangue periférico (PBMC) humanas. Inicialmente, foi realizado o ensaio de citotoxicidade em esplenócitos de camundongos BALB/c e PBMC. Posteriormente, foi avaliado o efeito do tratamento na linfoproliferação ativada por mitógeno por marcação com CFSE ou Celltiter Glo® e o efeito do composto na produção de mediadores inflamatórios, através do ELISA ou ELISPOT. A interferência da fisalina F no ciclo celular e no padrão de morte celular foram avaliados por citometria de fluxo. Investigou-se a terapia combinada da fisalina F com dexametasona utilizando Celltiter Glo®. Para investigação dos possíveis mecanismos de ação, avaliou-se o efeito do composto na atividade da calcineurina, a partir do kit de ensaio de atividade celular de calcineurina. O efeito in vivo foi avaliado em modelo de hipersensibilidade tardia. A interferência da molécula na expressão gênica foi avaliada por RT-PCR ou PCRarray. Em adição, foi avaliado o docking molecular entre a fisalina F com a calcineurina. A fisalina F, nas concentrações testadas (0,5, 1 e 2 µM), não apresentou citotoxicidade em esplenócitos de camundongos BALB/c e PBMC humanas. Após o tratamento com a fisalina F, houve inibição da linfoproliferação, apresentando ação sinérgica com a dexametasona. O tratamento com a fisalina F reduziu os mediadores inflamatórios IL-2, IFN-γ, IL-10, IL-4 e IL-13 e diminuiu células produtoras de IFNγ. O tratamento também induziu parada na fase G1 do ciclo celular e morte celular por apoptose. A fisalina F reduziu a atividade da calcineurina, além de reduzir o edema de pata em modelo de hipersensibilidade tardia. O composto modulou genes importantes da via do NFAT, como calcineurina, calmodulina e NFAT1. Os resultados demonstram uma potente atividade imunossupressora da fisalina F. Palavras-chaves: fisalina F; imumomodulação; linfócitos.

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