Autoria: Fernanda Gross Duarte
Orientação: Maria da Conceição Chagas de Almeida
Co-orientador: Edson Duarte Moreira Jr
Título da tese: “ÓBITOS E INTERNAÇÕES DECORRENTES DE INTOXICAÇÕES MEDICAMENTOSAS E NÃO-MEDICAMENTOSAS NO BRASIL”.
Programa: Pós-Graduação em Biotecnologia em Saúde e Medicina Investigativa
Data de defesa: 11/04/2022
Horário: 09h00
Local: Sala virtual do Zoom

RESUMO

INTRODUÇÃO: O consumo de substâncias químicas cresceu com o desenvolvimento das ciências e o aumento da produção e da circulação de bens. A exposição a produtos perigosos, a substâncias tóxicas ou potencialmente tóxicas, tornou-se um relevante problema de saúde pública em diversos países no mundo. Estima-se que mais de 25% da carga global de doenças está ligada a fatores ambientais, incluindo exposições e uso inadequado de produtos químicos tóxicos. As intoxicações medicamentosas também têm aumentado sua frequência globalmente e se constituem igualmente num problema importante de saúde pública. OBJETIVOS: Estimar
a incidência das hospitalizações por intoxicação não-medicamentosa (NMx), por medicamentos com prescrição (MRx) e por medicamentos isentos de prescrição (MIP), bem como a mortalidade desses agravos no Brasil, descrevendo as tendências observadas no período de uma década (2009 a 2018). MÉTODOS: Os dados de internações hospitalares e óbitos foram originados do DATASUS e os dados demográficos do IBGE (Instituto Brasileiro de Geografia e Estatística). Foram selecionadas as internações hospitalares cuja AIH (Autorização para Internação Hospitalar) indicasse como procedimento “tratamento de intoxicação ou envenenamento por exposição a medicamento e substâncias de uso não medicamentoso”. A incidência de hospitalização e a mortalidade foram calculadas separadamente para intoxicações causadas por NMx, MRx e MIP. Adicionalmente, as taxas foram estratificadas por sexo, faixa etária e região de residência no Brasil. A análise de tendência foi realizada por regressão linear generalizada pelo método de Prais-Winsten. RESULTADOS: No total, ocorreram mais de 276 mil internações relacionadas ao uso de substâncias químicas durante a década da avaliação do presente estudo. Foram reportados casos de hospitalização por intoxicação em 5.351 municípios de todos os estados no Brasil. As intoxicações por NMx foram as internações mais comuns (45,4%), seguidas das causadas por MRx (30,1%), enquanto as internações por MIP foram as menos frequentes (0,9%). A incidência média de internações por intoxicação NMx (6,28 por 100 mil habitantes) foi superior àquela de intoxicação por medicamentos com prescrição (MRx) (4,16 por 100 mil habitantes), RR=1,5 (IC 95% 1,3. – 1,7); e muito superior àquela de intoxicação por medicamentos isentos de prescrição (MIP) (0,13 por 100 mil habitantes), RR=48,3 (IC 95% 27,9 – 83,7). Ocorreram 4.326 óbitos (3,45%) entre as hospitalizações por intoxicação NMx, a letalidade foi semelhante àquela causada por MRx (3,11%), e superior a observada nas internações por MIP (1,93%). A mortalidade por intoxicação NMx (0,216 por 100 mil habitantes) também foi maior do que a causada por MRx (0,129 por 100 mil habitantes), RR=1,67 (IC 95% 1,34. – 2,09) e muito superior àquela causada por MIP (0,0025 por 100 mil habitantes), RR=86,4 (IC 95% 58,4. – 133,8). Houve uma tendência decrescente na mortalidade e na incidência de internações tanto das intoxicações NMx como das intoxicações por MIP durante o período do estudo no Brasil. A tendência da incidência de internações de intoxicações por MRx foi estacionária, mas a mortalidade mostrou uma tendência crescente no mesmo período. CONCLUSÕES: As internações por intoxicação não-medicamentosa e medicamentosa se constituem num grave problema de saúde pública pelo impacto na saúde individual e coletiva, pelo importante custo econômico e social, pelos riscos que oferece ao meio ambiente e, particularmente, pela natureza prevenível desses agravos.
Palavras-chave: Intoxicação, Medicamento, Farmacoepidemiologia, Mortalidade, Hospitalização.

Autoria: Camila Mattos Andrade
Orientação: Cláudia Ida Brodskyn
Título da dissertação: “Lactococcus lactis produtor de HSP65 como alteranativa terapêutica complementar para leishmaniose cutânea causada por Leishmania braziliensis“.
Programa: Pós-Graduação em Patologia Humana e Experimental
Data de defesa: 24/03/2022
Horário: 10h00
Local: Sala virtual do Zoom

RESUMO

INTRODUÇÃO: A leishmaniose é um conjunto de doenças negligenciadas, e uma das suas formas mais frequente no Brasil é a leishmaniose cutânea causada Leishmania braziliensis (L. braziliensis). Esta forma clínica é caracterizada por lesões cutâneas únicas na forma de úlcera com bordas elevadas e fundo necrótico, causada principalmente pela resposta inflamatória exacerbada, induzida por células Th1 produtoras de IFN-γ e apresentando um número reduzido de parasitas no local da lesão. Em modelos de doenças autoimunes e inflamatórias, o uso da indução de tolerância oral (TO) tem se mostrado promissor no desenvolvimento de estratégias terapêuticas, pois os mecanismos regulatórios gerados pela TO diminuem a inflamação causada nestas doenças. Trabalhos da literatura têm mostrado que as Lactococcus lactis (L. lactis), bactérias lácticas, não patogênicas e Gram-positivas são boas ferramentas para a indução da TO. Neste trabalho, utilizamos a cepa recombinante de L. lactis geneticamente modificada produtora da proteína de choque térmico 65 (Hsp65) derivada do Mycobacterium leprae. A Hsp65 possui um papel regulador importante no sistema imune, modulando principalmente respostas inflamatórias devido a sua capacidade de inibir a produção de citocinas, como TNF e IFN-γ, e de aumentar IL-10 pelas células T regulatórias (Tregs). OBJETIVO: Avaliar o potencial terapêutico da administração oral de L. lactis produtoras de Hsp65, como tratamento imunomodulador em modelo experimental de leishmaniose cutânea causada por L. braziliensis em camundongos BALB/c. MATERIAIS E MÉTODOS: Camundongos BALB/c foram desafiados na orelha com promastigotas metacíclicas de L. braziliensis. Após quatro semanas de infecção, os animais foram tratados por via oral com L. lactis produtoras ou não de Hsp65 durante quatro dias consecutivos. Nos diferentes grupos de animais avaliou-se a espessura da lesão, a carga parasitária, citocinas produzidas pelas células dos linfonodos drenantes da lesão e a frequência de células Tregs envolvidas na indução da TO durante todo o período de infecção. RESULTADOS: O acompanhamento semanal da espessura das lesões durante a infecção mostrou que, os animais tratados por via oral com L. lactis produtora de Hsp65 desenvolveu lesões menores e apresentaram uma menor destruição tecidual após o tratamento comparados aos animais dos grupos controles (Lb e Lb/Ø). O tratamento oral com Hsp65 reduziu a carga parasitária a partir de 6 semanas de infecção em relação aos animais que não receberam Hsp65. Foi observado também uma redução na produção de IFN-γ nos linfonodos drenantes da lesão dos animais tratados com Hsp65 seguido de um aumento de IL-10, evidenciando um balanço entre a produção de citocinas pro- e anti-inflamatórias. O tratamento oral com L. lactis produtora de Hsp65 também promoveu o aumento da frequência de células Tregs como CD4+CD25+Foxp3 + e CD4+LAP+ (TGF-β associado à membrana) nos linfonodos drenantes da lesão causada por L. braziliensis. CONCLUSÃO: A utilização da TO utilizando a proteína heteróloga Hsp65 apresenta boas perspectivas para seu emprego no tratamento da leishmaniose cutânea.
Palavras-chave: Hsp65, Leishmaniose, Leishmania braziliensis, Lactococcus lactis, Tolerância oral.

Autoria: Juan Manuel Cubillos Angulo
Orientação: Bruno de Bezerril Andrade
Título da tese: “Determinantes imunogenéticos para tuberculose”
Programa: Pós-Graduação em Patologia Humana e Experimental
Data de defesa: 23/02/2022
Horário: 13h00
Local: Sala virtual do Zoom

RESUMO

Estima-se que aproximadamente um quarto da população global está infectada com Mycobacterium tuberculoses (Mtb). Polimorfismos genéticos do hospedeiro podem ser importantes na determinação da suscetibilidade à infecção Mtb, porém seu papel não é totalmente compreendido. No presente estudo, em uma coorte de contatos próximos de pacientes com TB pulmonar confirmados microbiologicamente atendidos em ambulatório de referência de TB no Rio de Janeiro, identificamos potenciais biomarcadores genéticos de suscetibilidade à infecção (conversão do teste tuberculínico (TST)) por Mtb e desenvolvimento de TB ativa, de forma prospectiva e retrospectiva. Além disso, realizamos uma revisão sistemática visando análise de biomarcadores genéticos adicionais. No primeiro estudo, diferente “single nucleotide polymorphims” (SNPs) foram estudados como fatores de risco para conversão do TST e desenvolvimento de TB: TLR2 (rs5743708), TLR4 (rs4986791), TNFA (rs361525), IFNG (rs2430561), IL1B (rs1143627). Em um segundo estudo, 7 SNPs adicionais foram testados para associação com positividade do TT: genes candidatos IFI16-PYHIN1-AIM2 (rs1101998, rs1633256, rs866484), IFIT5 (rs59633641, rs10887959), IFIT1 (rs304478, rs304498) e IRF7 (rs11246213). Ambos os estudos foram realizados em contatos de casos de TB pulmonar confirmados microbiologicamente em laboratórios de referência, no Rio de Janeiro. Finalmente, realizamos uma revisão sistemática para avaliar a associação entre todos os SNPs relatados de CD14 e NOD2 e a ocorrência de TB, e como essa associação pode diferir em populações étnicas distintas. No estudo prospectivo, entre os 526 participantes, 60 tiveram conversão no TST e 44 desenvolveram TB ativa durante o acompanhamento. Na análise de regressão multivariada observou-se que os SNPs em genes TLR4 (odds ratio [OR]: 62,8, intervalo de confiança de 95% [IC 95%]: 7,5–525,3) e TNFA (OR: 4,2, IC 95%: 1,9–9,5) foram independentemente associados à conversão no TST. No estudo retrospectivo foram examinados 482 contatos, dos quais 296 contatos apresentaram TST positivo. Em um modelo multivariável, observamos que no modelo recessivo o SNP PYHIN1-IFI16-AIM2 rs1101998 (OR ajustado [aOR] = 2,90; IC 95% = 1,24-6,78; p = 0,014) e rs1633256 (aOR = 10,1; IC 95% = 2,20- 46,28; p = 0,003) foram associados a um risco aumentado de reatividade no TST. Na revisão sistemática, foram incluídos, 13 estudos que preencheram os critérios de seleção. Destes, 9 foram investigados do gene CD14 e em 6 foi relatada uma associação significativa entre o alelo T e os genótipos TT do SNP rs2569190 e aumento do risco de TB. Ademais, em 4 estudos foram relatadas relações entre os SNPs do gene NOD2 e a TB, e destes, foram observadas associações significativas de rs1861759 e rs7194886 com maior risco de TB em uma população chinesa Han em 2 estudos. Os resultados sugerem associações entre polimorfismos dos genes da imunidade e as probabilidades de infecção e/ou adoecimento por Mtb. No intuito de promover conhecimento sobre fatores imunogenétcos em TB na presente análise, foram apresentadas associações entre polimorfismos de genes relacionados à imunidade e as probabilidades de infecção e/ou adoecimento por Mtb. Palavras chave: Mycobacterium tuberculosis; Polimorfismo de nucleotídeo único; Teste Cutâneo da Tuberculina; CD14; NOD2; receptores Toll-Like; Fator de Necrose Tumoral.

Autoria: Rifkath Marie Laurence Rahimy
Orientação: Dalila Lucíola Zanette
Título da tese: “Rastreamento de moléculas diferencialmente expressas em neoplasias mieloproliferativas”.
Programa: Pós-Graduação em Patologia Humana e Experimental
Data de defesa: 22/02/2022
Horário: 09h00
Local: Sala virtual do Zoom

RESUMO

INTRODUÇÃO: As neoplasias mieloproliferativas (NMPs), mais especificamente a Policitemia vera (PV), a Trombocitemia essencial (TE) e a Mielofibrose primária (MFP), são um grupo de doenças clonais da medula óssea, compartilham a mutação JAK2V617F, entre outras características. As células estromais mesenquimais (MSCs) fazem parte do microambiente da medula óssea, e as influências mútuas das MSCs e do clone hematopoético são potencias determinante do fenótipo de NMP. OBJETIVO: O objetivo do presente trabalho foi investigar a expressão gênica e protéica das células estromais e hematopoéticas na PV, na TE e na MFP, em busca de moléculas que possam ser indicadas como biomarcadores de diagnóstico e prognóstico destas neoplasias. MATERIAL E MÉTODOS: As MSCs foram obtidas da medula óssea e os leucócitos do sangue periférico de pacientes com PV, TE, MFP e de indivíduos saudáveis. Extratos proteicos foram obtidos de MSCs de indivíduos saudáveis e de pacientes com PV e TE. O RNAs de MSCs e de leucócitos periféricos de controles saudáveis e de pacientes com PV, TE e MFP foi extraído pelo método de Trizol. Os RNAs foram convertidos em cDNA para as análises de qPCR e os extratos proteicos foram utilizados para análise por espectrometria de massas. RESULTADOS: A análise do proteoma de PV e TE comparados a controles indicou a maior expressão de VPS26A, CTTN, MAP4, TPD52L2, FAM175B, BAX em amostras de MSCs de PV comparadas a MSCs de indivíduos saudáveis, enquanto a proteína TNC mostrou-se menos expressa na PV. Nas MSCs de TE houve maior expressão de ALDH1A3, PON2 e SCP2; e menor expressão de RAB21 e RANBP1. As análises in silico identificaram genes diferencialmente expressos em MFP quando comparadas a controles, sendo que essas diferenças foram verificadas nas amostras de sangue periférico de um número maior de pacientes, com expressão diferencial significativa dos genes AVEN e CRACD, embora a expressão nos leucócitos tenha sido contrária àquela verificada nas MSCs de medula óssea. CONCLUSÕES: Os resultados obtidos indicam a expressão diferencial de algumas moléculas que podem ser potenciais marcadores das NMPs.

Palavras-chave: Células mesenquimais estromais, células tronco hematopoéticas, neoplasias mieloproliferativas, expressão gênica, expressão proteômica.

Autoria: Natália Dantas Fontes
Orientação: Fred Luciano Neves Santos
Título da dissertação: “AVALIAÇÃO DE ANTÍGENOS QUIMÉRICOS DO Trypanosoma cruzi NO DIAGNÓSTICO SOROLÓGICO DA DOENÇA DE CHAGAS CRÔNICA EM CÃES – UM ESTUDO DE FASE II”
Programa: Pós-Graduação em Biotecnologia em Saúde e Medicina Investigativa
Data de defesa: 09/03/2022
Horário: 09h00
Local: Sala virtual do Zoom

RESUMO

INTRODUÇÃO: Os cães são considerados reservatórios de importância epidemiológica para a doença de Chagas devido ao seu papel de sentinela, proximidade com os seres humanos e manutenção do ciclo de transmissão em ambientes domésticos e peridomésticos. Além disso, destaca-se a correlação existente com a soroprevalência em humanos. Mesmo com o impacto epidemiológico, a ausência de testes diagnósticos para a detecção de cães infectados é um importante entrave que traz riscos à saúde pública. Uma estratégia para ultrapassar esta limitação baseia-se na utilização de antígenos recombinates quiméricos do Trypanosoma cruzi. Nosso grupo, em um estudo de fase I, avaliou o potencial diagnóstico de quatro antígenos quiméricos e obteve resultados semelhantes aos encontrados em humanos. Desta forma, este estudo sucede ao de fase I, com um quantitativo amostral ampliado afim de avaliar os quatro antígenos quiméricos na detecção da infecção por T. cruzi por meio do ELISA indireto. OBJETIVO: Avaliar o desempenho diagnóstico dos antígenos recombinantes quiméricos do T. cruzi (IBMP-8.1, -8.2, -8.3 e -8.4) em imunoensaios para detecção de anticorpos IgG anti-T. cruzi em cães na forma crônica da doença de Chagas. MATERIAL E MÉTODOS: Os imunoensaios foram otimizados por checkerboard titration. Para o estudo de fase II foi avaliado o desempenho diagnóstico das IBMP a partir de 1.260 amostras séricas caninas provenientes de diferentes estados brasileiros. A reatividade cruzada para outras doenças infecto-parasitárias também foi avaliada em 752 amostras. Ao final, comparou-se o desempenho dos quatro antígenos com teste comercial humano adaptado à espécie canina. RESULTADOS: Os antígenos IBMP alcançaram valores de AUC que variaram entre 89,0-97,4%. O nível de exatidão variou de 87,8-96%. O maior índice de sensibilidade foi atribuído a IBMP-8.2 (90,3%), enquanto a IBMP-8.1, a IBMP-8.3 e a IBMP-8.4 obtiveram 74,8%, 72,6% e 79,6%, respectivamente. A maior especificidade encontrada foi para a IBMP-8.4 (99,6%), seguida pela IBMP-8.1 (90,6%), IBMP-8.2 (96,5%) e IBMP-8.3 (99,0%). O teste comercial adaptado, o Gold Elisa Chagas, apresentou sensibilidade de 62,3%, especificidade de 98,6% e acurácia de 89,9%. O menor índice de reatividade cruzada foi alcançado com a IBMP-8.2 com 0,9%, sendo esta molécula a que mais se aproximou de um teste ideal. CONCLUSÃO: Devido ao bom desempenho das moléculas IBMP no diagnóstico da infecção por T. cruzi em cães, estas são promissoras para a identificação da doença de Chagas canina. A utilização combinada destes antígenos é uma alternativa que visa aumentar os valores de sensibilidade e especificidade em estudos futuros, bem como em outras plataformas diagnósticas.
Palavras-chave: Doença de Chagas, Trypanosoma cruzi, Imunodiagnóstico, antígenos recombinantes quiméricos, cães.

Autoria: Davi Silva Vale Nascimento
Orientação: Bruno Solano de Freitas Souza
Título da dissertação: “Potencial terapêutico do PICTILISIB e seus efeitos na via hedgehog em linhagem metastática de carcinoma escamocelular oral”.
Programa: Pós-Graduação em Patologia Humana e Experimental
Data de defesa: 04/03/2022
Horário: 09h00
Local: Sala virtual do Zoom

RESUMO

O carcinoma escamocelular oral (CEO) é um grave problema de saúde pública com elevada prevalência em populações com baixo nível socioeconômico, sendo frequentemente diagnosticado em fase tardia, quando o prognóstico se torna reservado. Ainda há poucas opções de fármacos para o tratamento deste tumor nos pacientes. Previamente, demonstramos que a via embrionária Hedgehog (HH) está reativada neste tumor, levando a um perfil de maior agressividade. Deste modo, a busca por fármacos inibidores da via HH, seja inibindo sua ativação canônica ou não canônica, passa a ser de grande relevância para o tratamento do CEO. Dentre os mecanismos de ativação não canônica da via HH destaca-se a interação com PI3K/AKT, uma importante via de sobrevivência celular. O objetivo deste trabalho foi avaliar a atividade antitumoral in vitro e a inibição farmacológica de componentes da via HH por um inibidor farmacológico de PI3K, o Pictilisib, em linhagem metastática de CEO. Deste modo, foi realizado o tratamento das células HSC3 com Pictilisib em diferentes concentrações para avaliação da citotoxicidade, viabilidade celular, análise de apoptose por ensaio de Anexina-PI em citometria de fluxo, análise de migração celular por scratch assay, além da avaliação da expressão dos componentes da via HH por western blot, Imunofluorescência e RT-qPCR. O Pictilisib apresentou perfil de citotoxicidade na linhagem HSC3, com valor de CI50 de 0,05 µM. Nas concentrações de 0,97 μM e 1,94 μM, foi demonstrada significativa redução da viabilidade celular, além de aumento do percentual de células na fase sub-G1 após 48 e 72 h de incubação com o Pictilisib na concentração de 0,97 μM. O ensaio de Anexina-PI demonstrou indução de apoptose 48 e 72 h após incubação com o Pictilisib nas concentrações de 0,97 µM e 1,94 µM. O ensaio de migração celular demonstrou que o tratamento com Pictilisib reduziu a migração celular nos tempos de 6 e 24h. Através da técnica de Western blot, as proteínas PTCH1, SHH e GLI1 foram analisadas após o tratamento com o Pictilisib no período de 24h nas concentrações de 0,97 e 1,94 µM, mas não foi observada diferença na expressão destas proteínas com o tratamento. Através da técnica de imunofluorescência, as proteínas GLI1, GLI2 e SMO foram analisadas em relação à presença e à localização. Os resultados demonstram forte
imunoexpressão dos componentes citados, havendo marcação nuclear das proteínas GLI1, GLI2 e SMO em ambas as concentrações com o Pictilisib. A expressão gênica dos componentes da via Hedgehog (GLI1, GLI2 e GLI3), foi avaliada através de RTqPCR na linhagem HSC3 após 24 h de incubação com Pictilisib 1,94 µM. Não foi observada inibição da expressão do mRNA de GLI1 e GLI2, quando células tratadas foram comparadas com o controle não tratado. No entanto, observou-se aumento do mRNA de GLI3 após incubação com Pictilisib a 1,94 µM. Em conclusão, os dados deste estudo dão suporte para um potencial papel do Pictilisib como um fármaco promissor para utilização terapêutica no CEO. O papel deste fármaco na interação do PI3K/AKT com a via HH merece aprofundamento em estudos futuros.
Palavras-chave: Hedgehog; Pictilisib; PI3K/AKT.

Autoria: Sara Nunes de Oliveira Araújo
Orientação: Natalia Machado Tavares
Título da tese: O papel funcional do miR-193b e miR-205 na exposição in vitro de diferentes células humanas à Leishmania braziliensis
Programa: Pós-Graduação em Patologia Humana e Experimental
Data de defesa: 28/01/2022
Horário: 09h00
Local: Sala virtual do Zoom

RESUMO

As leishmanioses estão entre as enfermidades mais negligenciadas no mundo, afetando as populações mais pobres, principalmente em países em desenvolvimento. A leishmaniose cutânea (LC) é a forma mais frequente dessa doença, caracterizada por lesão(s) cutânea(s) ulceradas(s) com uma inflamação crônica descontrolada. Os mecanismos moleculares associados a regulações pós-transcricionais e a imunopatogênese da LC permanecem pouco compreendidos. Os microRNAs (miRNAs), pequenos RNAs endógenos não codificantes, surgiram nos últimos anos como moléculas-chave na regulação da expressão gênica. Dados do nosso grupo mostraram que o miR-193b, miR-671 e seus alvos estão fortemente correlacionados com o tempo de cura dos pacientes com LC. Estes achados sugerem que este eixo pode desempenhar um papel importante na LC, além de serem candidatos potenciais para o desenvolvimento de novas ferramentas para a doença. Além disso, comparamos o perfil de expressão de miRNAs com outras doenças inflamatórias de pele, onde apenas o miR-205 foi
encontrado com a expressão significativamente inibida em todas as doenças. Diante dessas evidências, este estudo avaliou o papel funcional dos miR-193b e miR-205 na exposição in vitro de diferentes células humanas à Leishmania braziliensis (Lb). No primeiro capítulo, investigamos o perfil de expressão do miR-193b na infecção por Lb em macrófagos humanos in vitro. Inicialmente, análises de predição in silico sugeriram que esse miRNA tem o TREM1, TLR4, TNFRSF1B, CCR7, CD40 e STAT5 como alvos potenciais. Também foi possível validar a expressão desses alvos em novas biópsias de pacientes com LC e apenas a STAT5 não apresentou diferença estatística. Posteriormente, os ensaios com macrófagos infectados por Lb mostraram que a exposição por 30 minutos ou 4 horas reduz significativamente a expressão do miR-193b. Em contrapartida, a expressão do TREM1 foi significativamente aumentada nos dois tempos de infecção, diferente dos demais alvos que não apresentaram uma diferença estatística no perfil de expressão. Com o intuito de avaliar o papel funcional desse miRNA, macrófagos foram transfectados com miR-193b e infectados por Lb por 4 e 12 horas. Não foram observadas alterações nos potenciais alvos ou mediadores inflamatórios. No entanto, após 12 horas, houve redução na taxa de infecção e carga parasitária, sugerindo que este miRNA tem papel no controle da infecção. No segundo capítulo, validamos o perfil de expressão do miR205 em novas biópsias de pacientes com LC. Análises in silico mostraram os alvos do miR205, tanto na LC quanto nas demais doenças, e os resultados indicam que há uma especificidade dos alvos para cada doença avaliada. Sendo assim, validamos os dois genes alvo mais modulados na LC: SULF1 e o IRF1. Ambos, significativamente aumentados nas biópsias, confirmando os resultados das análises. Considerando que os queratinócitos desempenham um papel fundamental na regulação da inflamação da pele, avaliamos a expressão desse miRNA em queratinócitos humanos imortalizados (HaCats) expostos a Lb por 4 ou 24 horas, diante de lesões mecânicas. Os dados sugerem que, independente das lesões, a exposição das HaCats à Lb reduz a expressão desse miRNA. Nas HaCats transfectadas com o miRNA e expostas a Lb não foram observadas alterações na expressão dos alvos preditos, mediadores inflamatórios ou proliferação celular. No entanto, o miR-205 regulou a migração dessas células, uma vez que o percentual de fechamento de lesão no ensaio in vitro foi maior nos grupos transfectados com esse miRNA e menor com a exposição a Lb. Esses dados mostraram que a regulação negativa do miR-205 pode ser um fenômeno comum em doenças inflamatórias de pele, independente da sua etiologia, podendo atuar em processos básicos da biologia da pele e influenciando a cicatrização. Sendo assim, o miR-205 pode ser considerado um candidato promissor para aplicação na prática clínica. Em conjunto, essas análises demonstram o potencial desses dois miRNAs na LC, podendo atuar desde processos iniciais da inflamação até o processo de cicatrização da lesão.

Palavras-chave: Leishmania braziliensis, microRNA, macrófagos, queratinócitos

Autoria: Camila Freitas Chaves
Orientação: Luciano Kalabric Silva
Título da dissertação: EPIDEMIOLOGIA DA ESQUISTOSSOMOSE EM UMA ÁREA URBANA DA CIDADE DE SALVADOR-BA
Programa: Pós-Graduação em em Biotecnologia em Saúde e Medicina Investigativa
Data de defesa: 28/01/2022
Horário: 14h00
Local: Sala virtual do Zoom

RESUMO

INTRODUÇÃO: No Brasil, apesar da diminuição na intensidade da migração rural-urbana, a população urbana continua crescendo constantemente. Isso, combinado a outros fatores, promove a urbanização acelerada e desordenada, levando ao surgimento de áreas com precárias condições de moradia e saneamento, e a disseminação e persistência da esquistossomose em áreas urbanas. OBJETIVO: O objetivo deste estudo foi descrever e explicar a distribuição da esquistossomose em uma área urbana da cidade de Salvador-BA, Brasil. MATERIAL E MÉTODOS: Em 2019, quatro pontos ao longo do rio do Cobre e um ponto no riacho vizinho foram selecionados para confirmar a presença de Biomphalaria sp. e avaliar a contaminação fecal de coleções hídricas pelo método Coliscan Easygel®. Um estudo de corte-transversal foi conduzido na comunidade com coleta de dados e amostras. Foi realizado um inquérito sociodemográfico e coletadas até três amostras de fezes em dias diferentes para diagnóstico de Schistosoma mansoni com Kato-Katz. As amostras positivas foram purificadas e genotipadas utilizando 15 marcadores microssatélites RESULTADOS: Dos cinco pontos de coleta de água, quatro apresentaram contaminação fecal e dois, a presença de Biomphalaria sp. Participaram dos inquéritos epidemiológico e parasitológico 1.134 residentes. A média de idade foi de 33,6 anos (21,0 DP), a maioria era do sexo feminino (59%). Testaram positivos para S. mansoni 62 participantes (5,5%), com uma carga parasitária média baixa (88,5 opg). Estão associadas a infecção S. mansoni as variáveis sexo masculino, idade maior que 20 anos, contato com água, frequência e duração do contato e tipos de contato relacionados a recreação. Os índices de diferenciação das infrapopulações (Di) e das infrapopulações sobre a população componente (Dic) foram ambos moderados. O tamanho da população efetivo (Ne) foi de 38.197, que é um número imensurável para nossos computadores. CONCLUSÃO: O bairro de Pirajá possui as condições ideias para a persistência e disseminação da esquistossomose e representa uma área de transmissão local em Salvador-BA. Pela grande relevância cultural e histórica do bairro, Pirajá precisa de uma intervenção infraestrutural tanto para auxiliar no controle da esquistossomose, quanto pela saúde do ambiente local. Palavras-chave: esquistossomose urbana, Schistosoma mansoni, saneamento básico.

Autoria: Ana Lucia Galvão Sales
Orientação: Deborah B. Mothé Fraga
Título da dissertação: “ESTUDO EPIDEMIOLÓGICO DA ESPOROTRICOSE NO MUNICÍPIO DE SALVADOR – BA”
Programa: Pós-Graduação em em Biotecnologia em Saúde e Medicina Investigativa
Data de defesa: 19/01/2022
Horário: 09h00
Local: Sala virtual do Zoom

RESUMO

Introdução: Apesar de ser uma doença negligenciada, a esporotricose é a micose subcutânea mais frequente no Brasil e uma das mais relevantes para a saúde pública, em especial nas últimas duas décadas. A ocorrência da esporotricose em humanos esteve associada por muito tempo à transmissão sapronótica decorrente da implantação traumática do fungo Sporothrix spp. a partir do ambiente contaminado, principalmente em atividades de jardinagem e horticultura. Porém atualmente tem-se observado sobretudo no Brasil, a emergência da esporotricose zoonótica, tendo o gato como animal mais envolvido nesse ciclo. O agente etiológico da esporotricose é o fungo termodimórfico do gênero Sporothrix. O potencial zoonótico da esporotricose foi reforçado pelo isolamento de Sporothrix spp. nas lesões de gatos. Sua ocorrência já foi registrada nos EUA, México, Peru, Colômbia, Argentina, Paraguai, Malásia, Espanha, Alemanha, Austrália, Japão, Tailândia, Reino Unido e Brasil. A infecção ocorre principalmente por meio de arranhões, mordidas ou contato com o exsudato de lesões cutâneas devido à alta carga de leveduras nos felinos infectados. Objetivo: Descrever a ocorrência e distribuição da esporotricose no município de Salvador – BA nos anos de 2018 e 2019. Método: O estudo foi realizado no município de Salvador, capital do estado da Bahia. Foram incluídos neste estudo animais suspeitos de esporotricose em Salvador oriundos de vigilância passiva e/ou ativa realizadas em 2018 e 2019 pelo Centro de Controle de Zoonoses da Secretaria Municipal de Saúde, captados após a confirmação dos primeiros casos. Os dados clínico-epidemiológicos foram coletados por questionário utilizado pela equipe de médicas veterinárias que realizaram a avaliação dos animais no domicílio dos mesmos. Resultados: Em Salvador, nos anos de 2018 e 2019, ocorreram 1.290 notificações de animais suspeitos para esporotricose, sendo que 87,6% eram da espécie felina, 65,0% dos animais avaliados eram machos, 95,8% não possuíam raça definida (SRD), 53,3% eram adultos, 75,7% não eram castrados, 50,3% eram criados como semi-domiciliados, 86,9% tinham acesso à rua e 83,9% tinham contato com outros animais, por serem criados em conjunto ou por saírem à rua. Das notificações avaliadas nas residências, cerca de 50% foram confirmadas. Os Distritos Sanitários com maior número de casos confirmados nos dois anos foram Boca do Rio, Itapuã, Cabula/Beirú e Subúrbio Ferroviário. Com relação aos casos humanos, observou-se um aumento de 80,6% dos casos entre 2018 e 2019, sendo que mais de 70% das ocorrências foram em mulheres, maiores de 50 anos. No ano de 2018, 51,6% dos casos humanos ocorreram na área de influência das residências com felinos positivos (até 1 Km de raio) e em 2019 esse percentual passou para 82,1% dos registros. Dentre as características avaliadas, gatos jovens e adultos apresentaram maior chance de confirmação do diagnóstico de esporotricose. O contato com outros animais considerados como suspeitos de estarem com esporotricose aumentou a chance de confirmação do diagnóstico. Conclusão: Observou-se com esse trabalho, o aumento e espalhamento dos casos de esporotricose pelo território, além da descrição da população envolvida. As localidades de ocorrência, tanto em animais como humanos apresentaram características similares de deficiências de infraestrutura, além de grande adensamento populacional e hábitos de criação dos animais em comum. A adoção de medidas multidisciplinares visando a abordagem de “Saúde única” devem ser adotadas com agilidade. Palavras chaves: esporotricose, Sporothrix, micose, Distrito Sanitário, Saúde Única.

Autoria: Caroline G. da Rocha
Orientação: Marilda de Souza Gonçalves
Título da dissertação: “Leucemia promielocítica aguda: uma revisão do cenário brasileiro”
Programa: Pós-Graduação em Patologia
Data de defesa: 21/12/2021
Horário: 09h00
Local: Sala virtual do Zoom

RESUMO

INTRODUÇÃO: a leucemia promielocítica (LPA) é um dos subtipos mais graves de leucemia mieloide aguda cujos avanços recentes na terapêutica permitiu alcançar altas taxas de sobrevida na doença, tornando-a um dos subtipos de leucemia com os melhores prognósticos. Apesar da LPA ser comumente conhecida como uma doença rara, atingindo cerca de 10% das LMA, dados recentes mostram prevalência alta da doença em latino-americanos, assim como em brasileiros. Além disso, as taxas baixas de sobrevida e de mortalidade elevada no Brasil são alarmantes para o caráter curável da doença. A descrição, delineamento e exploração dos dados brasileiros são necessários para conhecer o cenário da LPA no país. OBJETIVO: com a presente revisão sistemática, apresentamos o delineamento do cenário atual da leucemia promielocítica no Brasil a partir dos dados disponíveis na literatura, assim como possíveis hipóteses para esse cenário. METODOLOGIA: a busca sistemática foi realizada nas plataformas PubMed, Embase, Web of Science e LILACS. Foram coletados dados referentes a prevalência da LPA, assim como dados sociodemográficos, clínicos e laboratoriais de pacientes brasileiros. Dados referentes a evolução clínica como taxas de sobrevida e óbitos também foram coletados. RESULTADOS: Sessenta e quatro artigos foram selecionados. A prevalência da LPA foi fornecida por 46 estudos brasileiros e variou de 0% a 40%. A idade dos indivíduos no geral varia na faixa dos 10 aos 80 anos, porém há casos fora dessa faixa. A distribuição é semelhante entre os sexos, embora a maioria dos estudos apresente prevalência maior no sexo feminino. A frequência da M3v varia de 0% a 43,7% em brasileiros e a maioria dos brasileiros com LPA estão no grupo de risco intermediário ou alto de recidiva. As principais manifestações da doença reportados foram presença de coagulopatias (37,5%-72,8%), sangramentos (17,2%-90,9%), equimose (90,9%-92%) e febre (27%-31%). As alterações laboratoriais são características do quadro clássico de leucemia aguda, porém com leucocitose e plaquetopenia extremamente acentuada em alguns casos. A presença da t(15;17) varia de 84,6% a 100% dos indivíduos, enquanto a frequência do PML-RARα varia entre 74,7%-100%. Nove casos brasileiros de mutações variantes associados a LPA foram encontrados na literatura. A maioria dos estudos apresenta sobrevida global de 5 anos abaixo de 70% e a maior parte das mortes são precoces. CONCLUSÃO: Os dados dos estudos nacionais apontam para um cenário preocupante da LPA no Brasil. Acreditamos que este cenário sugere uma possível negligência no atendimento básico de saúde aos pacientes, com diagnóstico tardio e automedicação que pode ser melhorado com ações organizadas, que contribuam para o desenvolvimento de normativas nacionais, e com o comprometimento da comunidade médico-científica e o Ministério da Saúde.
Palavras-chave: Leucemia promielocítica aguda, leucemia mieloide aguda, revisão sistemática, Brasil.

Autoria: Marina Faillace de Amorim
Orientação: Patrícia Sampaio Tavares Veras
Título da dissertação: “Desenvolvimento da formulação contendo o fármaco 17-DMAG impregnado em membrana de celulose bacteriana para compor esquema terapêutico contra leishmaniose cutânea”
Programa: Pós-Graduação em Patologia
Data de defesa: 16/12/2021
Horário: 09h00
Local: Sala virtual do Zoom

RESUMO

A leishmaniose é uma doença tropical negligenciada, endêmica em mais de 90 países e, no Brasil está presente em todas as regiões, sendo considerada um problema de saúde pública. As manifestações clínicas variam entre formas cutâneas, que apesar de não serem fatais causam estigma social, e a visceral que, por sua vez, pode ser fatal. Sua transmissão ocorre por meio da picada de flebotomíneos fêmeas que, durante o repasto sanguíneo, inoculam promastigotas de Leishmania presentes em sua saliva. As promastigotas, então, infectam as células hospedeiras e se diferenciam na forma amastigota. Os tratamentos atuais mais utilizados são os antimoniais pentavalentes, além da Anfotericina B, pentamidina, paramomicina e miltefosina, porém, limitações como efeitos colaterais, aplicação invasiva, longos ciclos de tratamento, falha terapêutica ou alto custo levam o abandono do tratamento. Esses dados mostram a necessidade do desenvolvimento de novas drogas leishmanicidas. Neste cenário, a Hsp90 é uma chaperona envolvida no processo de estabilização e ativação de diversas proteínas cliente e é importante para a manutenção da homeostase celular. Em estudos anteriores, demonstramos que inibidores da Hsp90 são eficazes no controle de infecções causadas por Leishmania spp. em modelos in vitro e in vivo, chegando a zerar a carga parasitária e a reduzir citocinas pró-inflamatórias em camundongos BALB/c. No entanto, o uso prolongado in vivo, causou toxicidade. Desta forma, decidimos desenvolver uma formulação tópica, que por ser menos invasivo, hipotetizamos ser capaz de diminuir os efeitos tóxicos, ser de fácil aplicação, além de apresentar redução de custos. Assim, desenvolvemos formulações contendo 17-DMAG impregnado em membranas de celulose bacteriana (MCB), que é um biopolímero com propriedades curativas. O objetivo deste estudo foi avaliar o potencial quimioterápico do 17-DMAG, um inibidor da Hsp90, impregnado em MCB no tratamento da leishmaniose cutânea (LC) em modelos in vivo e in vitro de infecção por Leishmania braziliensis. Após diferentes testes, a impregnação das MCB seguiu as seguintes etapas: primeiramente as membranas foram cortadas com diâmetro de 3,5 cm, impregnadas com diferentes concentrações de 17-DMAG diluído em trealose 5% e secas em liofilizador. Para utilização nos ensaios, as MCB foram cortadas com punch de biópsia de 3 mm para os ensaios in vitro e de 8 mm para ensaios in vivo. Avaliamos a toxicidade das MCB sobre BMMΦ (CC50) e sua eficácia in vitro contra promastigotas axênicas de L. braziliensis (IC50). Após 72 horas de tratamento, foi obtido um valor de CC50 de 30,76 ± 1,29 nM, e IC50 de 159,9 ± 49,6 nM. Devido ao valor do IC50 ser menor do que o do CC50, não conseguimos calcular o valor do IC50 para índice de seletividade. A faixa de concentração usada para determinar o IC50 não causou toxicidade aos macrófagos, porém não teve efeito sobre as amastigotas intracelulares. Nos ensaios in vivo as concentrações de 311 e 155 µg/cm2 apresentaram toxicidade local com duas semanas de tratamento, mas não apresentaram toxicidade sistêmica. Concentrações menores, entre 1.000 e 125 ng/cm2 não apresentaram toxicidade local, sendo viáveis para ensaios de toxicidade in vivo. Estes dados, somados aos resultados anteriores com a droga livre, demonstram que, após ajustes de doses, 17-DMAG terá potencial para compor esquema terapêutico contra LC.

Palavras chave: Leishmaniose, Tratamento tópico, 17-DMAG, HSP90, Membrana de celulose bacteriana