Aluna: Camila Pimentel Sobrinho

Orientador: Dr. Adriano Queiroz Silva 

Coorientação: Dra. Jéssica Dias Petrilli

Título da Tese:  “Identificação de marcadores diagnósticos para tuberculose a partir de cultura de sangue total com lipídios do Mycobacterium tuberculosis”.

Programa: Pós-Graduação em Biotecnologia em Saúde e Medicina Investigativa

Data: 13/11/2025

Local: Sala virtual Zoom Educacional 03

Horário: 13h30

ID: 880 4592 1081 Senha: camila

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Titulares:

Dra. Tonya Azevedo Duarte – UFBA

Dra. Iukary Oliveira Takenami – UNIVASF

Dra. Theolis Costa Barbosa Bessa – IGM/Fiocruz (Presidente da Banca)

Suplente:

Dra. Deborah Bittencourt Mothé – IGM/Fiocruz

RESUMO:

INTRODUÇÃO: A Tuberculose (TB), doença infecciosa causada pelo Mycobacterium tuberculosis (Mtb), permanece um problema relevante na saúde pública. O diagnóstico atual depende de exames que apresentam limitações significativas, variando desde baixa sensibilidade, como na baciloscopia de escarro, até longos períodos de espera para liberação do resultado, como ocorre com a cultura do escarro. O teste geneXpert MTB/RIF® apresenta elevada sensibilidade e fornece resultados em até 24 horas após a coleta da amostra; entretanto, o alto custo do equipamento limita sua utilização em unidades básicas de saúde. Diante dessas limitações, a Organização Mundial de Saúde (OMS) recomendou o desenvolvimento de novos testes diagnósticos que utilizem amostras de fácil obtenção, como o sangue, que sejam de baixo custo e com resultado rápido. Em linha com essa demanda, nosso grupo de pesquisa tem avaliado as respostas celulares induzidas por lipídios do Mtb como estratégia para a identificação de marcadores diagnósticos da TB pulmonar ativa. OBJETIVO: Identificar e validar marcadores diagnósticos da tuberculose em amostras de sangue total estimuladas com lipídios do Mtb. MATERIAL E MÉTODOS: O estudo foi conduzido em três etapas: I- determinação das condições de cultura; II- identificação dos marcadores diagnósticos; III- validação do teste. Na primeira etapa, amostras de sangue total foram coletadas de pacientes com TB pulmonar (n = 13) e de indivíduos sadios (n = 13), sendo cultivadas com extrato de lipídios apolares (0,01 mg/mL e 0,05 mg/mL) a 37ºC e 5% de CO2 por 6, 24, 48 e 72 horas. Os sobrenadantes foram utilizados para a quantificação de TNF-α por ensaio de imunoabsorção enzimática (ELISA). Na segunda etapa, avaliou-se o potencial diagnóstico de 34 marcadores do hospedeiro, quantificados pela plataforma luminex em sobrenadantes de culturas de sangue total, estimulados ou não com extrato lipídico do Mtb, em 40 participantes (20 com TB e 20 Sintomáticos respiratórios [SR] – não TB). Na última etapa, os dois biomarcadores com melhor desempenho foram validados por ELISA em um grupo independente de 21 pacientes com TB e 33 SR não-TB. RESULTADOS: A cultura de sangue total com 0,05 mg/mL de extrato lipídico por 48h mostrou tendência a maior produção de TNF-α em indivíduos com TB, embora sem diferença estatisticamente significante em relação aos controles sadios. Nas culturas não estimuladas, oito biomarcadores (IL-18, IL-1RA, IL-1β, IL-8, IP-10, MIP-1β, SDF-1α e TNF-α) diferenciaram TB de SR – não TB, com áreas sob a curva (AUC) variando de 0,71 a 0,82. Análises combinatórias com quatro painéis de marcadores: IL-18 + IL-1β, IL-1RA + IL-18, IL-18 + IL-1β + IL-1RA e IL-18 + IL-1β + IL-1RA + MIP-1β apresentaram valores de AUC entre 0,84 e 0,90, especificidade acima de 90% e sensibilidade entre 70% e 75%. A avaliação de IL-1RA + IL-18 no ELISA resultou em AUC de 0,76, sensibilidade de 62%, especificidade de 88% e acurácia de 78%. CONCLUSÃO: Os achados indicam que, embora a bioassinatura IL-1RA + IL-18 não seja adequada para detecção de casos devido à baixa sensibilidade, sua alta especificidade sugere aplicabilidade como teste confirmatório ou como parte de um painel expandido de biomarcadores, cuja eficácia ainda deve ser explorada em estudos mais robustos e heterogêneos.

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