doutorado – Instituto Gonçalo Moniz

Dissertação avalia os efeitos da saliva do vetor da Leishmaniose na infecção

AUTOR: Paulo Sérgio de Morais da Silveira Mattos
ORIENTADORA: Camila Indiani de Oliveira
TÍTULO DA TESE: “Efeitos da Saliva de Lutzomyia intermedia sobre o recrutamento celular induzido por Leishmania Braziliensis”
PROGRAMA: Mestrado em Patologia Humana- Fiocruz Bahia
DATA DE DEFESA: 20/04/2017

RESUMO

A saliva de flebotomíneos tem uma série de componentes farmacológicos e imunomoduladores e há trabalhos que mostram que a imunidade à saliva protege contra a infecção por Leishmania. Neste trabalho, nós estudamos os efeitos da saliva de Lutzomyia intermedia, o principal vetor da Leishmania braziliensis no Brasil, no recrutamento celular induzido pela presença do parasita. Camundongos BALB/c foram inoculados com formas metacíclicas de L. braziliensis na presença ou não de sonicado de glândula salivar (SGS) de Lu. intermedia. Observamos que há um rápido recrutamento celular para o local da infecção, consistindo de diversos tipos celulares: macrófagos, monócitos, células dendríticas, neutrófilos e células NK. Apesar de observarmos flutuações nas frequências celulares ao longo dos tempos avaliados (2,12, 24 e 72h), o tempo de 24h após a inoculação foi aquele no qual observamos um maior efeito do SGS. Nesse tempo, a frequência de macrófagos e de neutrófilos presentes na orelha foi significativamente maior na presença da saliva. Não observamos mudanças significativas na frequência das populações estudadas ao avaliarmos o linfonodo de drenagem. Em seguida, avaliamos o efeito da saliva de Lu. intermedia sobre os neutrófilos, especificamente. Por meio de ensaios in vitro, não observamos uma modulação positiva na taxa de infecção, na produção de superóxido ou na taxa de apoptose de neutrófilos quando os mesmos foram expostos a L. braziliensis + saliva de Lu. intermedia. Por fim, avaliamos os efeitos da saliva sobre o desenvolvimento da leishmaniose experimental. Animais co-inoculados com formas metacíclicas de L. braziliensis + SGS de Lu. intermedia apresentaram lesões similares aos animais controle. Também não observamos aumento na carga parasitária na orelha ou no linfonodo de drenagem na presença da saliva. Esses resultados sugerem que a saliva de Lu. intermedia modula o recrutamento inicial de leucócitos no sítio da infecção mas não altera o curso do desenvolvimento da doença, em modelo experimental de infecção por L. braziliensis.

Palavras-chave: flebótomo, saliva, leishmaniose, L. braziliensis, Lu. Intermedia, recrutamento.

Diferentes testes na urina para diagnóstico de lesão renal aguda são analisados em tese

AUTORA: Maria Brandão Tavares
ORIENTADOR: Washington Luiz Conrado dos Santos
TÍTULO DA TESE: “Marcadores Biológicos para necrose tubular aguda em pacientes com doença glomerular”
PROGRAMA: Mestrado em Patologia Humana- Fiocruz Bahia
DATA DE DEFESA: 07/04/2017

RESUMO

A lesão renal aguda (LRA) é uma complicação frequente em pacientes com glomerulopatias, acometendo até 34% dos adultos com síndrome nefrótica (SNO) idiopática. O diagnóstico diferencial de necrose tubular aguda (NTA) de glomeulonefrite proliferativa ou crescêntica em pacientes com SNO e LRA é fundamental, visto que a NTA pode mimetizar quadro de glomerulonefrite rapidamente progressiva. Dados clínicos e laboratoriais podem ser úteis no diagnóstico diferencial da LRA na SNO, entretanto a distinção entre NTA e glomerulonefrite proliferativa ou crescêntica é feito pela biópsia renal, procedimento invasivo e que não está disponível amplamente. Novos biomarcadores para diagnóstico precoce e preditores diagnósticos na LRA têm sido identificados. Neste trabalho nós avaliamos o uso de testes baseados nas concentrações urinárias de kidney injury molecule-1 (KIM-1), neutrophil gelatinase-associated lipocalin NGAL, interleukin-18 (IL-18) e β2-microglobulin (β2M) para diagnóstico diferencial de LRA em pacientes com síndrome nefrótica e examinamos a associação das concentrações urinárias destes marcadores com lesão histológica consistente com NTA ou lesões glomerulares proliferativas. Adicionalmente, estudamos as diferenças na expressão de proteínas na urina de pacientes com síndrome nefrótica, com e sem necrose tubular aguda estabelecida histologicamente, por meio de eletroforese em gel de poliacrilamida (SDS-PAGE) que poderia ser útil na identificação de novos marcadores para LRA. Foram coletadas amostras de urina de 40 pacientes submetidos à biópsia renal para fins de diagnósticos e encaminhadas para o CPQGM-FIOCRUZ. Os pacientes foram divididos em 3 grupos de acordo com a presença ou ausência de NTA histologicamente definida; e presença de glomerulonefrite proliferativa: grupo CON sem necrose tubular ou lesão prolifertiva glomerular (n=17), grupo GNTA com necrose tubular e sem proliferacao glomerular (n=14), e grupo GNP com lesão proliferativa glomerular incluindo crescentes (n=9). LRA foi definida utilizando os critérios KDIGO. Foi coletada amostra de urina previamente à realização da biópsia renal, centrifugada a 2000 xg a 4°C e o sobrenadante armazenado a -80°C em alíquotas de 1 ml. As mensurações das concentrações dos biomarcadores foram realizadas utilizando imunoensaio enzimático (ELISA). A extração de proteína urinária foi realizada pelo método de precipitação da acetona. As concentrações proteínas das amostras foram dosadas pelo método do ácido bicicrônico (Micro BCA) e Bradford. As amostras de proteína (50μg) foram analisadas em SDS-PAGE a 15% na presença de dodecil sulfato de sódio. Resultados: A média de idade foi de 35 ± 16 anos, 22 (55%) eram mulheres, os principiais diagnósticos foram GESF (10, 25%), glemorulonefrite membranosa (10, 25%), Lesão Mínima (LM) (7, 18%), nefrite lúpica (6, 15%) e glomerulonefrite proliferativa (3, 8%). Os pacientes com NTA tiveram maiores concentrações urinárias de KIM-1 (P = 0.016), NGAL (P = 0.023) e β2M (P = 0.017) em comparação aos pacientes sem NTA. As concentrações urinárias de KIM-1 (P= 0.009) e NGAL (P= 0.002) também foram maiores nos pacientes com LRA comparado aos paciente sem LRA. As dosagens de NGAL (P= 0.034) e KIM-1 (P=0.024) urinários foram significamente maiores nos pacientes com NTA sem lesão glomerular proliferativa em comparaçao aos pacientes com glomerulonefrites proliferativas. Na análise das proteínas em SDS-PAGE, observamos a expressão de banda proteica com peso molecular 35 KDa apenas nos pacientes do grupo 1 (pacientes sem proliferacao glomerular ou lesao tubular). Conclusão: As concentrações urinárias de KIM-1 e NGAL foram capazes de distinguir pacientes com e sem LRA, mesmo na presença de síndrome nefrótica; e as dosagens de NGAL e KIM-1 urinárias podem ser úteis no diagnóstico diferencial entre NTA e glomerulonefrite proliferativa em pacientes com síndrome nefrótica. A presença de lesão proliferativa glomerular ou necrose tubular aguda resulta no desaparecimento de uma fração protéica de 35 kDa, e a lesão proliferativa, em redução na expressão protéica de fração de 28 kDa da urina de pacientes com síndrome nefrótica. O estudo dessas frações protéicas pode contribuir para novas estratégias no diagnóstico diferencial da LRA em pacientes com síndrome nefrótica.

Associação de alterações na medula óssea e distúrbios hematológicos na leishmaniose visceral canina é descrita em tese

AUTOR: Valter dos Anjos Almeida.
ORIENTADOR: Washington Luis Conrado dos Santos.
TÍTULO DA TESE: Alterações na medula óssea e distúrbios hematológicos na leishmaniose visceral canina.
PROGRAMA: Doutorado em Patologia Humana – UFBA /FIOCRUZ
DATA DE DEFESA: 27/01/2017

Resumo

Cães com leishmaniose visceral frequentemente apresentam uma ampla variedade de anormalidades hematológicas. Neste estudo, objetivou-se associar os distúrbios hematológicos com a distribuição das linhagens celulares e o perfil de expressão de citocinas na medula óssea de cães naturalmente infectados por Leishmania infantum. Após obtenção do diagnóstico e exames clínicolaboratoriais, as amostras foram coletadas e analisadas por microscopia convencional. Feito isso, foram utilizadas técnicas de biologia molecular para detecção de L. infantum e verificação da expressão de citocinas que podem influenciar na diferenciação celular na medula óssea. Diante das análises, a infecção por Leishmania foi detectada por ELISA em 47/58 (81,0%) e por cultura esplênica em 18/57 (31,6%). A maioria dos cães com cultura esplênica positiva apresentou detecção do DNA de L. infantum na medula óssea (p=0,0004) acompanhado por histiocitose (p=0,0046). Destes animais, os que também possuíam desorganização esplênica apresentaram diminuição de hemácias (p=0,0066), acompanhado pela menor quantidade de células da linhagem eritróide na medula óssea em relação aos com cultura negativa e baço organizado (p=0,0127). Essas alterações foram acompanhadas pela elevação da expressão gênica IFN-γ (p=0,0015) e TNF (p=0,0091) nos cães possuíam L. infantum na medula óssea. Desta maneira, cães com cultura esplênica positiva apresentam alterações de parâmetros hematológicos referentes a anemia e leucocitose com neutrofilia que são acompanhadas de hipoplasia eritróide e estão associadas a mudanças nas expressões de citocinas no microambiente medular, como o aumento de IFN-γ e TNF.

Palavras-chave: Citocinas, medula óssea, Leishmania infantum.

PGPAT divulga Edital de Seleção de Mestrado e Doutorado 2016.2

Os interessados em participar do processo seletivo do Programa de Pós-Graduação em Patologia Humana (PGPAT) já podem acessar o Edital de Seleção de Mestrado e Doutorado 2016.2. A proposta do Curso é formar docentes e pesquisadores, sendo que a condução de pesquisa de qualidade é essencial para o bom desempenho do ensino universitário. As inscrições poderão ser realizadas a partir do dia 1º de setembro.

Os candidatos ao PGPAT devem ser alunos graduados em curso da área biomédica, no entanto, a inscrição para seleção também poderá ser feita, condicionalmente, por aluno matriculado no último semestre do curso de graduação (estes candidatos devem comprovar a sua condição de graduados antes da matrícula).

O curso é composto por dois grandes eixos: Patologia Humana e Patologia Experimental.O Mestrado tem como objetivo o acúmulo de conhecimentos gerais da área de atuação do curso, aprofundamento dos conhecimentos em disciplinas específicas do campo onde atua, além da exposição prática ao método científico através da execução dos experimentos necessários ao seu trabalho de conclusão do curso.

O Doutorado é visto como a etapa de formação do pesquisador independente. Tal formação se dá pelo trabalho orientado por pesquisador já formado, onde a dedicação, o estudo independente e os trabalhos específicos são mais importantes que o ensino ministrado em disciplinas.

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PGBSMI divulgou resultado de seleção de Pós-Doutorado

O Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia em Saúde e Medicina Investigativa (PGBSMI), da Fiocruz Bahia, divulgou o resultado do processo seletivo de Pós-Doutorado (PNPD/CAPES).

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Inscrição para seleção de Pós-Doutorado encerra dia 17/06

Interessados em participar da seleção de pós-doutorado pelo programa de Pós-graduação em Biotecnologia em Saúde e Medicina Investigativa (PGBSMI) têm até o dia 17 de junho para se inscrever. Os candidatos devem possuir título de doutor, currículo atualizado na Plataforma Lattes do CNPq, não ser aposentado. As propostas devem ser alinhadas a uma das quatro áreas de concentração do programa.

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