AUTORA: Manuela da Silva Solcà.
ORIENTADORA: Patrícia Sampaio Tavares Veras.
TÍTULO DA TESE: Avaliação de biomarcadores de gravidade em cães naturalmente infectados por Leishmania infantum.
PROGRAMA: Doutorado em Patologia Humana – UFBA /FIOCRUZ
DATA DE DEFESA: 09/02/2017
Resumo
Nas Américas, a leishmaniose visceral (LV) é causada pelo protozoário Leishmania infantum, que pode acometer humanos e animais. Dentre estes, o cão é considerado o principal reservatório doméstico do parasito. O curso da LV canina (LVC) varia dentre os animais, podendo alguns se mostrarem resistentes a infecção, se mantendo subclínicos, e outros susceptíveis demonstrando sinais da doença. O estado de resistência ou susceptibilidade à LVC, reflete na gravidade da infecção do animal, e não pode ser definido pelo quadro clínico apresentado ou por qualquer parâmetro isolado de resposta imune. Padrões de suscetibilidade e resistência à infecção por Leishmania devem estar correlacionados ao quadro clínico e com biomarcadores parasitológicos como a carga parasitária do animal ou biomarcadores imunológicos. A análise de carga parasitária dos animais é um importante parâmetro para acompanhar o curso da infecção e avaliar sua gravidade, podendo funcionar também como um biomarcador parasitológico. Ademais, a busca e identificação de outros biomarcadores de gravidade ajuda a melhorar a compreensão da patogênese da LV no hospedeiro. O objetivo da presente tese consiste em avaliar biomarcadores parasitológicos e biomarcadores de exposição a saliva do vetor, e identificar biomarcadores inflamatórios indicativos da gravidade da infecção por L. infantum em cães. Para este intuito um protocolo de PCR quantitativa (qPCR) para quantificação da carga parasitária foi desenvolvido e validado. A qPCR padronizada teve seu desempenho avaliado empregando a análise de classe latente, comparando o seu desempenho com outras técnicas diagnósticas e empregando-se diferentes amostras biológicas. A sensibilidade para a qPCR de aspirado esplênico (95,8%) foi maior do que as obtidas para os outras amostras biológicas e testes diagnósticos. Posteriormente, após a reação de qPCR ter sido validada, esta foi aprimorada para utilização em estudos epidemiológicos, sendo padronizada em formato duplex tanto na forma líquida como no formato em gel (ready-to-use), adicionando-se à reação padronizada anteriormente, primers específicos para a detecção de um gene constitutivo canino. Em seguida, foi realizado um estudo exploratório de uma amostra de cães coletada durante um estudo de corte transversal, em Camaçari-BA, no qual foram avaliados simultaneamente biomarcadores parasitológicos, imunológicos de exposição à saliva do vetor, e biomarcadores de inflamação, em cães com diferentes quadros clínicos de LVC, visando identificar perfis associados com a gravidade da doença clínica. A análise identificou uma bioassinatura distinta em cães com diferentes manifestações clínicas, caracterizada por uma diminuição dos níveis de LTB-4 e de PGE-2 e um aumento de CXCL1 e CCL2, de acordo com o agravamento da doença. Além disso, utilizando uma combinação de 3 parâmetros distintos (LTB-4, PGE-2 e CXCL1) fomos capazes de discriminar entre escores clínicos diferentes pela construção de uma curva ROC. Foi detectado também, que cães com escores clínicos elevados apresentaram-se, mais frequentemente, com negatividade para IgG anti-saliva e elevadas cargas parasitárias. Este estudo permitiu a avaliação e identificação de vários biomarcadores em cães, que podem ser importantes para auxiliar na avaliação do curso da doença e prognóstico por médicos veterinários, além de futuramente poder ajudar na distinção entre cães resistentes ou susceptíveis direcionando estratégias de controle da LVC em áreas endêmicas. Assim, neste trabalho foi possível concluir que existem biomarcadores parasitológicos como a carga parasitária, biomarcadores imunológicos e inflamatórios como CXCL1, CCL2, LTB-4, PGE-2, além da produção de anticorpos específicos contra as proteínas LJM 11 e LJM 17 da saliva do vetor, que são capazes de diferenciar animais infectados por L. infantum de acordo com seus diferentes quadros clínicos.
Palavras-chave: Leishmaniose Visceral Canina, Biomarcadores, qPCR, Cão.
