AUTORA: ALELUIA, Milena Magalhães.
ORIENTADORA: GONÇALVES, Marilda de Souza.
TÍTULO DA TESE: Avaliação de Biomarcadores em indivíduos com doença falciforme da região sul da Bahia
PROGRAMA: Doutorado em Patologia Humana – UFBA/ Fiocruz Bahia
DATA DE DEFESA: 12/08/2016
RESUMO
INTRODUÇÃO: A doença falciforme (DF) e uma desordem genética, com elevada prevalência mundial e heterogeneidade clínica. A apresentação clinica dos indivíduos com anemia falciforme (AF) e doença HbSC está relacionada a fisiopatologia da anemia hemolítica, além da influência de parâmetros hematológicos, bioquímicos, presença da talassemia alfa com deleção de 3.7 Kb, haplótipos ligados ao grupo de genes da globina beta S (βS) e polimorfismos de um único nucleotídeo (SNPs) relacionados a síntese da HbF. Fatores que contribuem para o estabelecimento de biomarcadores associados a gravidade e mecanismos fisiopatológicos da DF.
OBJETIVO: Caracterizar a população em estudo, analisando biomarcadores, eventos clínicos e marcadores genéticos associados aos mecanismos fisiopatológicos e gravidade da DF na região Sul da Bahia.
MÉTODOS: Consiste em um estudo de corte transversal e casuística composta por 200 pacientes com DF acompanhados pelo Centro de Referência a Doença Falciforme de Itabuna, Bahia e, 36 pacientes com AF da Fundação de Hematologia e Hemoterapia do Estado da Bahia, Brasil, no período de 2013 a 2015. Os indivíduos apresentaram idade entre 01 e 61 anos, sendo identificados 70,5 % (141/200) pacientes com AF e 29,5 % (59/200) com a doença HbSC. Todos envolvidos assinaram o termo de consentimento livre e esclarecido e responderam ao questionário sócio-demográfico. Foram realizadas analises de parâmetros hematológicos, bioquímicos, metabolitos do oxido nítrico, investigação do perfil de hemoglobinas e diagnostico de hemoglobinopatia por cromatografia liquida de alta performance (HPLC); além da análise de polimorfismos genéticos como, detecção da talassemia alfa com deleção de 3.7kb através de reação em cadeia de polimerase (PCR). Os haplótipos ligados ao grupo de genes da globina- βS foram determinados por PCR seguida pela digestão com enzimas de restrição (PCRRFLP). A identificação dos SNPs: BCL11A gene rs6732518; rs766432, HMIP gene rs11759553; rs35959442 e OR51B5/6 gene rs4910755; rs7483122, no cromossomo 2, 6 e 11, respectivamente, foi realizada por PCR em Tempo Real utilizando sondas da TaqMan.
RESULTADOS: Foram envolvidos 200 pacientes acompanhados pelo Centro de Referência a Doença Falciforme de Itabuna, sendo 52,0 % (104/200) do sexo feminino, 22,0 % (44/200) com idade de 6 a 10 anos e 20,0 % (40/200) de 21 a 30 anos (40/200). A cor parda autodeclarada foi mais observada em 52,0 % (104/200) dos pacientes. A idade do primeiro diagnostico em até 6 meses de vida correspondeu a 38,0 % (76/200) e, desse grupo, 68 pacientes foram diagnosticados por triagem neonatal. Em relação a escolaridade, 60,5 % (121/200) relataram algum tipo de grau de instrução. Observamos que 87,5 % (70/80) dos pacientes pediátricos fizeram uso profilaxia medicamentosa. Encontramos que a hospitalização esteve mais associada aos pacientes com AF sem uso de hidroxiureia (HU) com frequência de 91,8 % (90/99). A partir dos marcadores genéticos, encontramos frequência de 0,16 para o gene -α3,7Kb, sendo 4 pacientes homozigotos (-α/-α) e 28 heterozigotos (-/αα), além disso, o haplótipo BEN foi mais frequente, seguido do haplótipo CAR. Na avaliação de biomarcadores me pacientes com AF, evidenciamos que concentrações elevadas de desidrogenasse lática (LDH) sugerem um perfil hemolítico. Os metabolitos do oxido nítrico (NO) demonstraram influencia na ativação endotelial e, níveis elevados de lipoproteína de alta densidade de colesterol (HDL-C) em associação aos elevados níveis de lipoproteína de baixa densidade de colesterol (LDL-C) estiveram associados a uma condição inflamatória. A co-heranca da talassemia alfa com a AF está associada a melhora do quadro hemolítico, com menor contagem de plaquetas; porém, contribui para viscosidade sanguínea. Na análise dos pacientes com AF acompanhados Centro de Referência a Doença Falciforme de Itabuna e Fundação de Hematologia e Hemoterapia do Estado da Bahia, Brasil, encontramos, o perfil genético modulador da HbF, o haplótipo CAR como mais frequente na população estudada, demonstrando níveis intermediários de HbF e elevados níveis de HbS. No que se refere ao tratamento com HU, os pacientes com AF receberam doses de 15, 20 e 25 mg/kg/dia e o tempo de utilização variou de 2 meses a 4 anos e 2 meses, observando melhora no perfil hematológico, com redução na contagem de leucócitos e plaquetas. Além disso, verificamos que a melhora dos parâmetros laboratoriais e perfil clinico estiveram associados ao tempo de utilização. A análise dos SNPs localizados nos genes BCL11A, HMIP e OR51B5/6 demonstraram maior influência sobre o perfil hematológico e na associação do SNP rs766432 no gene BCL11A em utilização de HU foi encontrado perfil hematológico com elevada contagem de hemácias e concentração de hemoglobina, menor contagem de plaquetas e níveis reduzidos de bilirrubina direta e indireta. Em relação a caracterização clínica, a associação com a presença do SNP rs766432 no gene BLC11A e HU foram observadas menor frequência de eventos clínicos, no entanto, a litíase biliar esteve elevada. Sugerimos que a ocorrência desse evento clinico ocorra de forma independente a presença do SNP.
CONCLUSÃO: Concluímos que parâmetros laboratoriais e marcadores genéticos contribuem para compreensão dos mecanismos fisiopatológicos e heterogeneidade clínica da DF na população alvo do presente estudo. Ressaltamos a importância relativa a investigação desses marcadores no intuito de seguimento clinico adequado e delineamento de estratégias para o desenho de novos fármacos e modalidades terapêuticas.
Palavras-chave: Doença Falciforme, Biomarcadores, Talassemia Alfa 3.7kb, Haplótipos da globina- βS, Polimorfismos, Hidroxiureia.
