AUTORIA: Carolina Kymie Vasques Nonaka
ORIENTAÇÃO: Milena Botelho Pereira Soares
TÍTULO DA TESE: “Estudo da expressão de micrornas na cardiopatia chagásica crônica”
PROGRAMA: Pós-Graduação em Biotecnologia em Saúde e Medicina Investigativa – FIOCRUZ
DATA DE DEFESA: 08/11/2018

RESUMO

INTRODUÇÃO: A doença de Chagas é uma infecção causada pelo protozoário Trypanosoma cruzi, sendo considerada uma das maiores causas de morte por insuficiência cardíaca na América Latina. Cerca de 30% dos indivíduos infectados pelo T. cruzi desenvolvem a cardiomiopatia chagásica crônica (CCC). Até o momento, não há nenhum tratamento eficaz para a CCC. O desenvolvimento de novas estratégias terapêuticas e biomarcadores mais acessíveis à população com o potencial de prever à progressão da cardiomiopatia é de fundamental importância. Os microRNAs (miRNAs) são moléculas curtas e endógenas que agem regulando a expressão gênica. Sabe-se que os miRNAs são diferencialmente expressos na insuficiência cardíaca e desempenham um papel crítico na patogênese da doença. A identificação de miRNAs específicos que possam ser correlacionados à doença poderão resultar em aplicações clínicas.

OBJETIVOS: O objetivo deste estudo foi avaliar o papel de miRNAs como biomarcadores e possíveis alvos terapêuticos da cardiopatia chagásica crônica.

MATERIAIS E MÉTODOS: Foi comparado o perfil de expressão de miRNAs em soro de sete indivíduos com doença de Chagas crônica e três indivíduos saudáveis. Após a triagem, foram selecionados alguns miRNAs e avaliado o potencial como biomarcadores de disfunção cardíaca em uma coorte de 42 pacientes. O efeito terapêutico também foi explorado após a seleção de um miRNA com potencial terapêutico. A seleção do miRNA alvo foi baseada em uma triagem inicial no modelo experimental e análise de predição in sílico. O papel do miR-21 na produção de colágeno foi avaliado in vitro utilizando fibroblastos cardíacos. Camundongos C57Bl/6 infectados com T. cruzi foram tratados com o inibidor LNA miR-21. O efeito terapêutico foi avaliado através de análises morfológicas, imunofenotipagem, dosagem de citocinas e expressão gênica por RT-qPCR.

RESULTADOS: Após a triagem de miRNAs, 3 miRNAs que estavam superexpressos nos indivíduos cardiopatas foram explorados como biomarcadores em uma coorte de 42 indivíduos. Foi encontrado um aumento de miR-19a e miR29b nos indivíduos cardiopatas, enquanto miR-21 estava superexpresso nos dois grupos com doença de Chagas (indeterminados e cardiopatas). O miR-19a mostrou correlação positiva com disfunção cardíaca, classe funcional e percentual de fibrose. Já o miR-29b mostrou uma correlação negativa com a fração de ejeção e o strain do ventrículo esquerdo. Foi demonstrada também a superexpressão desses miRNAs em amostras de coração explantados de indivíduos com cardiopatia chagásica crônica. Em culturas in vitro, observamos um aumento de expressão do miR-21 em fibroblastos cardíacos humanos e um aumento de miR-19a e miR29b em cardiomiócitos derivados de iPSCs. O miR-21 foi selecionado como um possível alvo terapêutico após a triagem por PCR array in vivo e análise in sílico. O bloqueio do miR-21 reduziu a produção de IFN-γ e TNF-α in vivo. Além disso, análises morfológicas mostraram redução de fibrose em camundongos tratados com LNA anti-miR-21.

CONCLUSÕES: Os nossos resultados demonstram que os miRNAs desempenham um papel importante na CCC e sugerem que o miR-19a pode ser explorado como biomarcador de progressão da disfunção cardíaca em indivíduos na fase indeterminada. Já o miR-21 parece participar de processos inflamatórios e fibróticos no modelo experimental, sugerindo ser um potencial alvo terapêutico.

Palavras-Chave: Doença de Chagas; Trypanosoma cruzi; miRNA; Cardiopatia; Fibrose; biomarcadores, alvo terapêutico.