Discente: Vanessa Sousa Nazaré Guimarães
Orientação: Clarissa Gurgel de Araújo Rocha
Título da tese: “EFEITOS DA INIBIÇÃO FARMACOLÓGICA DE GLI-1 NA AUTOFAGIA EM CÉLULAS DE CARCINOMA ESCAMOCELULAR ORAL METASTÁTICA”.
Programa: Pós-Graduação em Patologia Humana
Data de defesa: 10/02/2023
Horário: 09h00
Local: Sala do Zoom
ID da reunião: 851 9334 6679
Senha de acesso: Ensino

Resumo

INTRODUÇÃO: O carcinoma escamocelular oral (CEO) é uma neoplasia agressiva com elevada morbimortalidade e apesar dos avanços científicos relacionados a sua biologia, estes ainda não proporcionaram impacto positivo na terapêutica e prognóstico deste tumor. A reativação da via de sinalização Hedgehog (Hh) se destaca na patogênese do CEO e a sua inibição representa um alvo terapêutico promissor. Nesse contexto, a via Hh interage com a autofagia e esta relação representa uma oportunidade emergente para otimizar esta estratégia, sendo que dentre os inibidores de autofagia apenas a cloroquina e a hidroxicloroquina apresentam aprovação para uso terapêutico em humanos. OBJETIVO: Estudar o efeito biológico de GANT61 na autofagia, em células metastáticas de CEO. METODOLOGIA: A citotoxicidade de GANT61 (18 e 36 μM) e cloroquina (10 μM) em células HSC3 foi avaliada inicialmente pelo método de Alamar Blue por 72 horas. O ensaios de viabilidade celular foi realizado através do CellTiter-Glo®️ por 12, 24 e 48 horas de tratamento de GANT61 (18 e 36 μM), cloroquina (10 μM) e a associação destes fármacos. A morfologia celular foi avaliada no sistema de alto conteúdo pela marcação do citoesqueleto com faloidina 568 após tratamento das condições por 24 horas. A expressão das proteínas do fluxo autofágico (LC3 e P62) foi avaliada após tratamentos através de Western Blot e imunofluorescência, e, posteriormente, analisadas utilizando o sistema de imagem Operetta HTS. A avaliação ultraestrutural das células HSC3 após 24 horas de tratamento foi realizada por microscopia eletrônica de transmissão (MET). RESULTADOS: A análise da citotoxicidade da GANT61 e cloroquina em células HSC3 demonstrou CI50 de 36 µM e 11,6 µM, respectivamente. A associação terapêutica do GANT61 com a cloroquina demonstrou redução da viabilidade celular e incremento de alterações da morfologia das células HSC3. O acúmulo da expressão de LC3 e de P62 foram observados de forma mais acentuada nas combinações de GANT61 (18 e 36 μM) com cloroquina (10 μM) em 24 horas de tratamento, assim como foi possível observar a presença de autofagossomos em células HSC3 tratadas com GANT61 de forma isolada e combinada. CONCLUSÃO: A associação do composto GANT61 com o inibidor autofágico, cloroquina, promove uma acentuação do efeito citotóxico deste composto em células HSC3, o que pode indicar o papel citoprotetor da autofagia em células de carcinoma escamocelular oral. Além disso, ação de GANT61 com a cloroquina acentua o efeito inibitório da cascata autofágica caracterizada pelo aumento da expressão de LC3 e de P62 com maior acúmulo de autofagossomos no citoplasma celular. Entretanto, novos estudos são necessários a fim de melhor compreender os mecanismos envolvidos nessa modulação. Palavras-chave: Autofagia; Carcinoma de células escamosas; Proteínas Hedgehog; Quimioterapia.