AUTORA: Carla Pires Magalhães
ORIENTADOR: Fábio Rocha Formiga
TÍTULO DA DISSERTAÇÃO: “Desenvolvimento de nanoformulações de uso tópico contendo anfotericina b e clorito de sódio para leishmaniose tegumentar”
PROGRAMA: Pós-Graduação em Biotecnologia em Saúde e Medicina Investigativa (Fiocruz)
DATA DE DEFESA: 20/02/2019

RESUMO

A Leishmaniose Tegumentar Americana (LTA) é uma enfermidade polimórfica da pele e das mucosas provocada pelo parasito do gênero Leishmania. As opções de tratamento apresentam limitações, sobretudo toxicidade e resistência aos fármacos, comprometendo a segurança e a eficácia da terapêutica. A busca por um tratamento tópico é recomendado pela OMS, considerando que uma ação leishmanicida e cicatrizante poderia resultar em benefícios aos pacientes. Esta ação poderia ser alcançada por associações de fármacos incorporados em nanopartículas e formulados em preparações farmacêuticas semi-sólidas.Anfotericina B (Anf-B) é um antibióticopoliênico, já utilizado na terapêutica da LTA na forma de preparações lipídicas intravenosas, incluindo lipossomas. O clorito de sódio (NaClO2) tem sido investigado pelo seu potencial oxidativo e ação cicatrizante em lesões causadas por L. tropica. O presente trabalho busca investigar o potencial da associação Anf-B/NaClO2 como base para um novo tratamento da LTA a partir de nanoformulações de uso tópico contendo esses agentes. Foram realizados ensaios de citotoxicidade do NaClO2 (1000a 0,49μM) e da Anf-B (10a 0,005μM) frente a formas promastigotas axênicas de L. braziliensis (MHOM/BR/01/BA788)(4×105 parasitos/poço) para determinação do IC50 destes compostos. Para avaliar o efeito combinado, NaClO2 e Anf-B foram testados de acordo como método deproporções fixas modificado (1:1; 1:5; 5:1). Por outro lado, a viabilidade celular de macrófagos peritoneais de camundongos BALB/c e queratinócitos humanos (HaCaT) (5×104 macrófagos/poço) foi avaliada na presença de cada tratamento individual e a CC50 foi calculada. Estes ensaios foram realizados utilizando o método colorimétrico de Alamar blue®. Avaliou-se a atividade de NaClO2 sozinha e em combinação com Anf-B sobre macrófagos infectados com L.braziliensis. A atividade de NaClO2 foi avaliado sobre a viabilidade de amastigotas axênicas de L.braziliensis, utilizando o método colorimétrico de Alamar blue®. Imagens de MEV e MET foram obtidas de promastigotas e amastigotas axênicas tratadas com 14 μM de NaClO2. Formulações semissólidas foram desenvolvidas contendo Anf-B em nanopartículas lipídicas sólidas (NLS) e livre. Estudo de liberação do fármaco in vitro em células de Franz foi realizado por um período de 12 horas (0, 30min, 1h, 2h, 4h, 6h, 8h e 12 h). Estudos de estabilidade destas formulações foram realizados em um período de 14 dias. Os resultados demonstram que NaClO2 e Anf-B apresentaram IC50 médio de 9,66 μM e 0,11 μM, respectivamente, sobre o crescimento de formas promastigotas após 72 h de cultivo. Imagens de MEV e MET sugerem uma atividade sobre o aumento do estresse oxidativo de NaClO2 sobre promastigotas. A associação dos dois compostos resultou em efeito aditivo com índice de combinação médio de 0,98 ± 0,09. Quanto aos ensaios de viabilidade celular, NaClO2 e Anf-B apresentaram valores de CC50 de 856,3 μM e >50 μM, respectivamente. O índice de seletividade do NaClO2 foi estimado em 88,6 e da Anf-B >454,5. O NaClO2 não apresentou atividade sobre a viabilidade de amastigotas intracelular e extracelular, o que foi reforçado por imagens de MEV e MET. Estudos de liberação in vitro em células de Franz demonstraram que Anf-B foi liberada de forma mais lenta e gradual quando em sistema nanoestruturado e todas as formulações mantiveram-se estáveis ao longo de 14 dias. Pela primeira vez, este trabalho demonstrou a atividade do NaClO2 em Leishmania do Novo Mundo. Adicionalmente, apresentou o potencial farmacotécnico de nanoformulações contendo Anf-Bpara a terapêutica da LTA.

Palavras-chave: leishmaniose cutânea; anfotericina B; clorito de sódio; formulação tópica; nanotecnologia.