Autoria: Davi Silva Vale Nascimento
Orientação: Bruno Solano de Freitas Souza
Título da dissertação: “Potencial terapêutico do PICTILISIB e seus efeitos na via hedgehog em linhagem metastática de carcinoma escamocelular oral”.
Programa: Pós-Graduação em Patologia Humana e Experimental
Data de defesa: 04/03/2022
Horário: 09h00
Local: Sala virtual do Zoom

RESUMO

O carcinoma escamocelular oral (CEO) é um grave problema de saúde pública com elevada prevalência em populações com baixo nível socioeconômico, sendo frequentemente diagnosticado em fase tardia, quando o prognóstico se torna reservado. Ainda há poucas opções de fármacos para o tratamento deste tumor nos pacientes. Previamente, demonstramos que a via embrionária Hedgehog (HH) está reativada neste tumor, levando a um perfil de maior agressividade. Deste modo, a busca por fármacos inibidores da via HH, seja inibindo sua ativação canônica ou não canônica, passa a ser de grande relevância para o tratamento do CEO. Dentre os mecanismos de ativação não canônica da via HH destaca-se a interação com PI3K/AKT, uma importante via de sobrevivência celular. O objetivo deste trabalho foi avaliar a atividade antitumoral in vitro e a inibição farmacológica de componentes da via HH por um inibidor farmacológico de PI3K, o Pictilisib, em linhagem metastática de CEO. Deste modo, foi realizado o tratamento das células HSC3 com Pictilisib em diferentes concentrações para avaliação da citotoxicidade, viabilidade celular, análise de apoptose por ensaio de Anexina-PI em citometria de fluxo, análise de migração celular por scratch assay, além da avaliação da expressão dos componentes da via HH por western blot, Imunofluorescência e RT-qPCR. O Pictilisib apresentou perfil de citotoxicidade na linhagem HSC3, com valor de CI50 de 0,05 µM. Nas concentrações de 0,97 μM e 1,94 μM, foi demonstrada significativa redução da viabilidade celular, além de aumento do percentual de células na fase sub-G1 após 48 e 72 h de incubação com o Pictilisib na concentração de 0,97 μM. O ensaio de Anexina-PI demonstrou indução de apoptose 48 e 72 h após incubação com o Pictilisib nas concentrações de 0,97 µM e 1,94 µM. O ensaio de migração celular demonstrou que o tratamento com Pictilisib reduziu a migração celular nos tempos de 6 e 24h. Através da técnica de Western blot, as proteínas PTCH1, SHH e GLI1 foram analisadas após o tratamento com o Pictilisib no período de 24h nas concentrações de 0,97 e 1,94 µM, mas não foi observada diferença na expressão destas proteínas com o tratamento. Através da técnica de imunofluorescência, as proteínas GLI1, GLI2 e SMO foram analisadas em relação à presença e à localização. Os resultados demonstram forte
imunoexpressão dos componentes citados, havendo marcação nuclear das proteínas GLI1, GLI2 e SMO em ambas as concentrações com o Pictilisib. A expressão gênica dos componentes da via Hedgehog (GLI1, GLI2 e GLI3), foi avaliada através de RTqPCR na linhagem HSC3 após 24 h de incubação com Pictilisib 1,94 µM. Não foi observada inibição da expressão do mRNA de GLI1 e GLI2, quando células tratadas foram comparadas com o controle não tratado. No entanto, observou-se aumento do mRNA de GLI3 após incubação com Pictilisib a 1,94 µM. Em conclusão, os dados deste estudo dão suporte para um potencial papel do Pictilisib como um fármaco promissor para utilização terapêutica no CEO. O papel deste fármaco na interação do PI3K/AKT com a via HH merece aprofundamento em estudos futuros.
Palavras-chave: Hedgehog; Pictilisib; PI3K/AKT.