Autoria: Ramona Tavares Daltro
Orientação: Fred Luciano Neves Santos
Título da dissertação: “WESTERN BLOT COMO FERRAMENTA DIAGNÓSTICA PARA IDENTIFICAR A DOENÇA DE CHAGAS CRÔNICA UTILIZANDO PROTEÍNAS RECOMBINANTES QUIMÉRICAS”.
Programa: Pós-Graduação em Biotecnologia em Saúde e Medicina Investigativa
Data de defesa: 05/08/2021
Horário: 09h00
Local: Sala virtual do Zoom

RESUMO

INTRODUÇÃO: A doença de Chagas (DC) é causada pelo Trypanosoma cruzi. Sua forma de infecção pode ser vetorial, oral ou congênita, além da transfusão sanguínea. No Brasil, o número de indivíduos infectados varia de 1,9 a 4,6 milhões e, na América Latina, de 5 a 7 milhões. A fase crônica da doença é caracterizada pela presença de anticorpos IgG anti-T. cruzie o seu diagnóstico é realizado por métodos sorológicos, principalmente o ELISA indireto. A OMS preconiza a utilização de dois testes distintos para o diagnóstico da DC e a combinação dos resultados define os indivíduos como positivos, negativos ou, no caso de discordância entre eles, inconclusivos. Neste último caso, um teste confirmatório deve ser empregado, como o Western blot (WB) ou a PCR; no entanto, esta última apresenta baixa sensibilidade na fase crônica da doença. Quatro antígenos recombinantes quiméricos, denominados IBMP-8.1, IBMP-8.2, IBMP-8.3 eIBMP-8.4 foram expressos pelo nosso grupo e avaliados em estudos de fase I, IIe III, utilizando o ELISA, o microarranjo líquido e a imunocromatografia, obtendo acurácia de 95 a 100%. Estes antígenos também foram submetidos à avaliação para detecção da DC em cães. Em 2016, o único teste de Western blot produzido no Brasil foi descontinuado e, por conta disso e devido ao elevado desempenho diagnóstico conferido aos antígenos IBMP, investigamos a utilização destas moléculas em diagnosticar a DC utilizando ensaios de WB.

OBJETIVO: Avaliar e validar o desempenho diagnóstico dos antígenos recombinantes quiméricos do T. cruzi (IBMP-8.1,IBMP-8.2, IBMP-8.3 e IBMP-8.4) como matrizes antigênicas utilizando plataforma de WB no diagnóstico da DC crônica.

MATERIAL E MÉTODOS: Foram avaliadas 22 amostras positivas, 24 negativas e 3 positivas para leishmaniose visceral. A padronização dos ensaios foi realizada através de diferentes diluições dos antígenos, dos anticorpos conjugados e das amostras séricas. A validação do potencial diagnóstico foi realizada através de curvas ROC. A reatividade cruzada também foi avaliada para leishmaniose visceral.

RESULTADOS: Todos os antígenos IBMP apresentaram 100% de sensibilidade, especificidade e acurácia, com exceção doantígeno IBMP-8.3, que obteve 90,9% de sensibilidade, 100% de especificidade e 95,7% de acurácia. Todavia, não houve diferença significativa nos referidos valores.

CONCLUSÕES: No presente estudo (fase I ou prova de conceito), os antígenos IBMP apresentaram elevada capacidade em diferenciar amostras positivas das negativas para a DC, sendo, portanto, elegíveis para o estudo de fase II.

Palavras-chave: doença de Chagas, Trypanosoma cruzi, Imunodiagnóstico, Western blot.