Autoria: Natália Erdens Maron de Freitas
Orientação: Fred Luciano Neves Santos
Título da dissertação: “CONJUGAÇÃO DE ANTÍGENOS RECOMBINANTES QUIMÉRICOS DO Trypanosoma cruzi À PEROXIDASE E SUA AVALIAÇÃO COMO FERRAMENTA DIAGNÓSTICA PARA DETECÇÃO DA DOENÇA DE CHAGAS”.
Programa: Pós-Graduação em Biotecnologia em Saúde e Medicina Investigativa
Data de defesa: 10/08/2021
Horário: 14h00
Local: Sala virtual do Zoom

RESUMO

INTRODUÇÃO: O ELISA geralmente é o teste de escolha para o diagnóstico da doença de Chagas(DC), no entanto, o seu desempenho depende da preparação antigênica utilizada na fase sólida, podendo levar a resultados falso-positivos e reações cruzadas. A utilização de antígenos recombinantes quiméricos pode superar esta limitação. Quatro antígenos quiméricos do T. cruzi (IBMP-8.1, IBMP-8.2, IBMP-8.3 e IBMP-8.4) foram desenvolvidos e avaliado sem estudos defase I e II. Contudo, a utilização de anticorpo secundário anti-IgG humano marcado com peroxidase, como ocorre na metodologia indireta, limita o uso da técnica para a detecção de anticorpos espécie-específicos e classe-específicos. Para proporcionar a identificação da DC em diferentes espécies através do mesmo ensaio é possível utilizar o próprio antígeno quimérico marcado com peroxidase, através da metodologia do ELISA sanduíche duplo antígeno(DAS-ELISA).

OBJETIVO: Avaliar e validar o desempenho diagnóstico dos antígenos IBMP-8.1, IBMP-8.2, IBMP-8.3 e IBMP-8.4 como matrizes antigênicas e agentes de detecção após conjugação à peroxidase, para o diagnóstico da DC em humanos.

MÉTODOS: O DAS-ELISA foi otimizado por checkerboard titration. Para o estudo da fase I(prova de conceito), foram avaliadas 207amostras positivas e 205negativas. A reatividade cruzada para outras infecções também foi avaliada utilizando 68 amostras.

RESULTADOS: As condições selecionadas para realização dos ensaios foram 25ng de antígeno, conjugado diluído de 1:2.000 para todas as moléculas e ausência de diluição sérica. No presente estudo, as áreas abaixo da curva dos antígenos IBMP-8.1,IBMP-8.2, IBMP-8.3 e IBMP-8.4 foram de 98,7%, 99,5%, 98,6% e 98,8%, respectivamente. Dentre as amostras positivas, o antígeno IBMP-8.1 classificou 53 (25,6%) como falso negativas, o IBMP-8.2, 27 (13%), o IBMP-8.3, 24 (11,6%) e o IBMP-8.4, 43 (20,8%), conferindo valores de sensibilidade de 74,4%, 87%, 88,4% e 79,2%, respectivamente. O único antígeno que não atingiu uma especificidade de 100% foi o IBMP-8.3, com 96,6%. Esta foi também a única molécula a apresentar reatividade cruzada com uma amostra de HTLV.

CONCLUSÃO: O DAS-ELISA é uma ferramenta promissora para o diagnóstico da DC e, apesar dos altos valores de AUC encontrados, o desempenho deste ensaio foi diferente dos valores obtidos pelo nosso grupo ao empregar esses antígenos no ELISA indireto, por este motivo, melhorias serão consideradas para aumentar a sensibilidade do DAS-ELISA no estudo de fase 2.

Palavras-chave: doença de Chagas, Trypanosoma cruzi, Imunoensaio, Imunodiagnóstico, ELISA.