AUTOR: Vinicius Pinto Costa Rocha
ORIENTADORA: Milena Botelho Pereira Soares
TÍTULO DA TESE: Avaliação da Proteína Cinase DYRK (Dual-Specificity Tyrosine-Regulated Kinase) como Alvo Molecular para o Desenvolvimento de fármacos Anti-Leishmania.
PROGRAMA: Doutorado em Patologia Humana (UFBA /Fiocruz)
DATA DE DEFESA: 25/09/2017

RESUMO

INTRODUÇÃO: As leishmanioses compreendem um grupo de doenças com ampla distribuição mundial, causada por parasitos pertencentes ao gênero Leishmania. As doenças podem se manifestar de diferentes formas clínicas, como a forma visceral, a mais grave, e as formas cutâneas. O tratamento com os antimoniais pentavalentes apresenta inúmeros efeitos adversos, além do crescente número casos de falha terapêutica. Alternativas a este tratamento estão disponíveis, mas também são associadas a efeitos adversos graves, necessitam de hospitalização e monitoramento dos pacientes, além do alto custo. Assim, existe a necessidade pela busca de novos medicamentos para o tratamento das leishmanioses. A seleção e a validação de um alvo farmacológico constitui uma das estratégia empregadas para a descoberta de novos tratamentos. Parasitos do gênero Leishmania são heteroxênos, sendo capazes de sobreviverem em organismos distintos: o inseto vetor e o hospedeiro vertebrado. O conhecimento dos mecanismos moleculares que proporcionam a diferenciação da Leishmania nas formas metacíclica e amastigota, além da manutenção da viabilidade desta última no hospedeiro mamífero, certamente contribuirá para o desenvolvimento de novos fármacos. DYRKs são proteínas cinases encontradas em diferentes organismos, sendo relacionadas com a modulação do ciclo celular e a manutenção da viabilidade mediante condições de estresse, como alta temperatura e privação de nutrientes.

OBJETIVO: Avaliar o potencial de utilização da proteína cinase LinDYRK1 como alvo molecular para o desenvolvimento de fármacos anti-Leishmania.

MÉTODOS: Células superexpressando LinDYRK1 foram geradas a partir da transfecção de parasitos tipo selvagem com o vetor pXNG-LinDYRK1. Após a recombinação homóloga, a linhagem knockout facilitada foi gerada. A essencialidade da LinDYRK1 foi avaliada através da seleção negativa com o ganciclovir. O fenótipo de células knockout foi avaliado por microscopia confocal, análise do ciclo celular, microscopia eletrônica e infecção de macrófagos murinos in vitro. A análise do conteúdo lipídico foi realizada por espectrometria de massas e cromatografia gasosa.

RESULTADOS: Células superexpressando LinDYRK1 apresentam alteração do ciclo celular com retenção em G1. A ausência da LinDYRK1 é tolerada em promastigotas em fase replicativa. Células knockout não sustentam a fase estacionária e apresentam fenótipo induzido pela ausência desta cinase. O knockout apresenta morfologia arredondada durante a fase estacionária, além acúmulo na fase G2/M do ciclo celular. Ao nível ultraestrutural, observou-se alterações na membrana celular, intensa vacuolização no citoplasma e acúmulo de corpúsculos lipídicos. Entretanto, não houve aumento na produção destas moléculas na linhagem LinDYRK1 knockout. Por outro lado, houve um aumento discreto na quantidade de ácidos graxos saturados. Além disso, a ausência da LinDYRK1 resultou em maior sensibilidade de promastigotas ao choque térmico e menor sobrevivência no interior de macrófagos murinos.

CONCLUSÃO: Diante dos resultados apresentados é possível concluir que a cinase LinDYRK1 está envolvida com a manutenção da viabilidade do parasito durante a fase estacionária. A LinDYRK1 desempenha um papel biológico importante no ciclo de vida do parasito, podendo estar envolvida nos eventos iniciais de estabelecimento da infecção no hospedeiro vertebrado. Dessa forma, esta cinase pode constituir um alvo para o desenvolvimento de novos fármacos.

Palavras-chave: Leishmania. Leishmaniose. Farmacologia. Tratamento. Cinase.